FITC anti-His-Tag

对比 Strep-tag 与 His-tag 系统异同点？

质，小分子或是金属。当融合有亲和标签的蛋白通过标签-配体作用结合再层析基质上时，通过洗杂步骤，即可去除掉其他的细胞成分。 为了洗脱所需要的蛋白质，通过改变缓冲液的条件，如pH，或通过竞争亲和标签和配体连接的方法来进行。 但怎样的纯化是较为成功的呢？仅达到所需的质量量级，如毫克级（或克级）即可满足吗？ 这些并不简单。质在蛋白纯化中同样尤为重要，比如，就蛋白的生物活性和纯度而言，通常会有所要求。   以下我们来讨论并且比较2种技术： His-tag系统和Strep-tag®系统，都使用了亲和层析法来纯化

荧光素FITC标记抗体的方法

当FITC在碱性溶液中与抗体蛋白反应时，主要是蛋白质上赖氨酸的r氨基与荧光素的硫碳胺键(thiocarbmide)结合，形成FITC-蛋白质结合物，即荧光抗体或荧光结合物。一个IgG分子中有86个赖氨酸残基，一般最多能结合15～20个，一个IgG分子可结合2～8个分子的FITC，其反应式如下FITC-N=C=S + N-H2-蛋白质 → FITC-NS-C-N-H2-蛋白质常用Marsshall(1958)法标记荧光抗体，也可以根据条件采用Chadwick等标记法或Clark

FITC标记抗体-改良法

      试剂：       1. 0.01mol/L pH7.2 PBS配方。将NaCl 18g、Na2HPO4 1.15g、KH2PO4 0.2g 溶于2000ml三蒸水中，调整pH至7.2；       2. 0.5mol/L pH9.0碳酸盐缓冲液配法。量取0.5mol/L Na2CO3(5.3%)10ml 加入0.5mol/L NaHCO3(4.2%)90ml中，充分混合后，调整pH至9.0；       3. 3%中碳酸钠水溶液的配制。称取1.5g无水正碳酸钠充分溶解于50