FITC标记葡聚糖20

荧光素FITC标记抗体的方法

当FITC在碱性溶液中与抗体蛋白反应时，主要是蛋白质上赖氨酸的r氨基与荧光素的硫碳胺键(thiocarbmide)结合，形成FITC-蛋白质结合物，即荧光抗体或荧光结合物。一个IgG分子中有86个赖氨酸残基，一般最多能结合15～20个，一个IgG分子可结合2～8个分子的FITC，其反应式如下FITC-N=C=S + N-H2-蛋白质 → FITC-NS-C-N-H2-蛋白质常用Marsshall(1958)法标记荧光抗体，也可以根据条件采用Chadwick等标记法或Clark

FITC标记抗体-改良法

ml三蒸水中即成；       方法与步骤：       根据Marshall氏法高效价的抗人球蛋白兔免疫血清，分离球蛋白。       1. 用0.15 mol/L NaCl的盐水及0.15 mol/L pH9.0的NaHCO3-Na2CO3缓冲液稀释使每毫升内含抗体10mg，缓冲液为总量的10%；       2. 将以上溶液降温至4℃，按蛋白：荧光素=50—80mg：1mg的比例加入异硫氰酸荧光素，在0—4℃下电磁搅拌12—14h；       3.用半饱和硫酸铵将标记球蛋白

FITC标记抗体-Chadwick氏法

烧瓶内，放入冰槽中；       2.  荧光素的准备。按每毫克免疫球蛋白加0.01mg荧光素计算，称取所需的荧光素量，用3%重碳酸钠水溶液溶解；       3.  将上述已准备好的抗体与荧光色素溶液等量混合，充分搅拌，使其在0—4℃冰箱中结合18—24h；       4.  透析。荧光素与球蛋白结合完毕后，将球蛋白的溶液以2500r/min离心20min，除去其中少量的沉淀物后，装入透析袋中再置于烧杯中，在0—4℃下用pH8.0的缓冲盐溶液透析过夜；