- ￥7040
- 齐源
- 5321-10rxn
- 进口
- 2025年12月05日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
sulfo-Cyanine7 antibody labeling kit
- CAS号：
/
- 保质期：
保质期12个月
- 供应商：
齐源生物
- 保存条件：
4℃
- 规格：
10 次
这是一个用磺基-Cyanine7 荧光团标记相似大小的抗体和蛋白质的试剂盒。染料通过 NHS 酯化学连接，然后使用封闭的离心柱通过凝胶过滤去除多余的荧光团。该方案只需要大约 40 分钟的时间，并在 PBS 缓冲液中提供脱盐抗体，每个抗体含有最佳数量的荧光团。该试剂盒包含 10 个反应的组分，每个反应最多 100 ug 抗体。
抗体标记试剂盒
该试剂盒用于制备每个抗体具有 2.5-3 个标记的标记抗体。该试剂盒包含用于 10 次标记反应的所有试剂和材料，每次反应 100 ug 抗体。染料是一种 NHS 酯，控制过量。它在弱碱性 pH 值下与抗体赖氨酸的胺基反应。抗体的纯化是通过使用离心柱的凝胶过滤来实现的。这些试剂盒包含磺化水溶性染料，最适合标记敏感蛋白，包括抗体。| 套件组件 | 数数 | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| 1321-10rxn 10 次反应 |
3321-10rxn 10 次反应 |
7321-10rxn 10 次反应 |
5321-10rxn 10 次反应 |
6321-10rxn 10 次反应 |
||
| N1320, Sulfo-Cyanine3 NHS 酯, 1 rxn | 10 | — | — | — | — | |
| N3320, Sulfo-Cyanine5 NHS 酯, 1 rxn | — | 10 | — | — | — | |
| N7320, Sulfo-Cyanine5.5 NHS 酯, 1 rxn | — | — | 10 | — | — | |
| N5320, Sulfo-Cyanine7 NHS 酯, 1 rxn | — | — | — | 10 | — | |
| N6320, Sulfo-Cyanine7.5 NHS 酯, 1 rxn | — | — | — | — | 10 | |
| 脱盐离心柱，PBS | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | |
| 脱盐容器瓶，1.5 mL | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | |
| 脱盐废液瓶，2 mL | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | |
| PBS 片剂，用于 100 mL 缓冲液 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | |
| 15050，DMSO，标签级，1 mL | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | |
| 1584-05mL，叠氮hua钠溶液，3%，0.5 mL | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | |
| 1689-15mL，碳酸氢钠，126 毫克 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | |
保质期12个月。
协议
1. 抗体制备。
标记反应的最佳条件如下：浓度为 1 mg/mL 的抗体溶解在 0.1 M 碳酸氢钠溶液中。叠氮hua钠与标签兼容。如果抗体浓度低于 1 mg/mL，则应进行浓缩。抗体制剂应不含氨基酸、BSA 等蛋白质和使 pH 值达到不利（2-7.5 或 9-12）范围的缓冲液成分。2. 建立反应。
2.1。将抗体的碳酸氢钠溶液（100 uL* 中的 100 ug）添加到荧光团中，涡旋，并在室温下孵育 30 分钟。* 如果要标记较少量的抗体，将冻干染料溶解在 10 uL 无水 DMSO 中，每 10 ug 抗体取 1 uL 溶液。染料在 DMSO 中的溶液应立即消耗。
3. 标记抗体的纯化。
3.1。准备色谱柱。色谱柱在使用前应处于室温。凝胶应使用涡旋重悬。将色谱柱放入废液容器（无盖）中，以 1,000 g 离心 2 分钟（必须小心控制速度 - 对于标准 6 cm 转子，1,000 g = 3800 rpm）。柱子的小凸起应朝外。3.2. 应用 400 uL 的 1x PBS 缓冲液，以 1,000 g 离心 2 分钟。
3.3. 从废液容器中取出色谱柱。将其放入收集管（带盖）中。将 100 uL 反应混合物加到柱上，孵育 1 分钟，然后以 1,000 g 离心 2 分钟洗脱抗体。添加 1/100 体积的 100x 叠氮hua钠。可以分装抗体以延长其保质期。当前的等分试样可以在 +4 °С 下存储，其余的可以在 -20 °С 下存储。
4. 染料与抗体比率的测量。
要计算染料与抗体的比率，请测量结合物的吸收光谱，或在 280 nm (A AB ) 和染料最大吸收 (A Dye ) 处的吸收。染料标记抗体的典型吸收光谱如下所示。根据染料的不同，最大值的波长可能会有所不同。
标记抗体的吸收光谱包含染料峰（波长较长）和抗体峰（约 280 nm）。染料与抗体的比率使用以下公式计算：
with Dye/AB — 每个抗体分子的平均荧光团数，A染料 — 样品在染料最大吸收处的光密度，A AB — 样品在 280 nm 处的光密度，ε AB — 抗体在 280 nm 处的摩尔消光系数（210,000 IgG), ε Dye — 染料在最大吸收处的摩尔消光系数（见下表），CF 280 — 染料的校正因子（见下表）。
| 染料 | 最大,纳米 | ε | CF 280 |
|---|---|---|---|
| 磺基花青3 | 548 | 162,000 | 0.06 |
| 磺基花青5 | 646 | 271,000 | 0.04 |
| 磺基花青5.5 | 673 | 195,000 | 0.11 |
| 磺基花青7 | 750 | 240,600 | 0.04 |
| 磺基花青7.5 | 778 | 222,000 | 0.09 |
计算示例
用磺基花青5标记IgG抗体并纯化后，得到具有上述吸收光谱的溶液。确定染料与蛋白质的比例。使用吸收光谱，可以找到以下值： A Dye = 0.184，染料吸收最大值（646 nm，见表），A AB = 0.066（在 280 nm），对于 IgG，ε AB = 210000；ε染料= 271,000，CF 280 = 0.04。
染料/AB — 每个抗体有 2.43 个荧光团分子。
结果解释和抗体储存
在大多数情况下，最佳染料与抗体的比例是每个抗体 2-3 个染料分子。由于荧光的浓度猝灭，增加高于该值的染料负载不会改善荧光信号。当反应过程中连接的荧光团太少时，减少每次反应的抗体负载。使用过期的试剂盒也会导致这种结果。我们建议测试标记抗体与其抗原的结合。标记的抗体可以储存在 -20 °С。当前使用的等分试样应储存在 +4 °С 以避免冻融循环。偶联物的稳定性由抗体本身决定，而不是由荧光团或化学键决定。标记的抗体不应长时间暴露在阳光直射下，但可以很好地耐受环境光照。
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文献和实验Cyanine Dye Purification Protocol
Preparation of salt buffers The buffers are used for both HPLC purification and Sep-Pak purification. High salt buffer (HSB): 1M triethylammonium acetate, pH 8.0 10% acetonitrile
of substituted unsymmetrical cyanine SYTO probes has recently become commercially available. Derived from thiazole orange, SYTO display low intrinsic fluorescence, with strong enhancement upon binding to DNA and/or RNA. Broad selection of excitation/emission
生物技术有限公司自2007年开始以结核抗体基因检测技术进行结核试剂盒开发研究，并以金标免疫层析阵列技术检测结核病人的血清抗体，从技术层面解决了结核分枝杆菌抗体检测特异性不高的问题，而且还利用两种抗原检测的互补效果提高了检测灵敏度。目前，成功研制的结核抗体快速检测(只需5-6分钟)试剂盒获得新器械产品注册证后已进入市场销售，为结核抗体检测提供了一项新的快速检测手段。
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