LumiPure 基因组 DNA 血液和口腔试剂盒

LumiPure 基因组 DNA 血液和口腔试剂盒详细如下：
LumiPure 基因组 DNA 血液和口腔试剂盒旨在使用离心柱从生物样品中分离总（基因组、线粒体和病毒）DNA。该套件包括所有必要的组件。首先，使用裂解液 BB 和蛋白酶 K 进行细胞裂解。裂解液 BB 允许 DNA 选择性地结合到柱中的膜上。在接下来的步骤中，对结合的 DNA 进行一系列洗涤。洗涤液的特殊配方可以完全去除柱膜上的杂质。最后，用洗脱缓冲液或必要时用去离子水洗脱基因组 DNA。

套件规格：

• 样本：全血、口腔拭子、白细胞、培养的哺乳动物细胞
• 操作时间：30分钟
• 柱结合能力：20 µg DNA
• DNA 典型产量：全血 (100 µL) – 1–3 µg，口腔拭子 – 0.5–2 µg，培养细胞 (1 × 10 ⁶ ) – 3–6 µg
• DNA 质量：30–50 kb 大小，OD 260/280 1.7–1.8

分离的 DNA 适用于 PCR、限制性内切酶消化、Southern 印迹、制备 Sanger 测序和 NGS 的样品等。

用户提供的设备和试剂：

• 加热块（或者，可以使用水浴）；
• 带有转子的微型离心机，适用于 1.5 mL 试管，能够离心 >10,000 RPM (6,700 × g)；
• 96% 乙醇；
• 1.5 mL 微量离心管（2 管用于从 1 个生物样品中纯化 DNA）；和
• 用于从培养的哺乳动物细胞中纯化 DNA 的磷酸盐缓冲液 (PBS)。

在开始之前

1. 用 96% 乙醇将洗涤液 B的浓缩物稀释 5 倍（将 4 体积的 96% 乙醇添加到瓶子上指定的 1 体积浓缩物中）。在标签上标记已添加乙醇。
2. 将 600 µL 蛋白酶 K 稀释缓冲液加入含有冻干蛋白酶 К的小瓶中。彻底混合并短暂离心。
    
   ！制备后将蛋白酶 K 溶液储存在 -20 °C。
3. 如果在裂解液 BB或 清洗液 A中形成任何沉淀 ，则在不高于 50 °C 的温度下孵育溶液，直至沉淀完全溶解。

所有离心步骤均在室温下进行，转速为 10,000–13,000 RPM (6,700–11,000 × g)（除非另有说明）。

从全血中纯化 DNA

该试剂盒设计用于处理 100 μL 全血（含有肝素、EDTA、柠檬酸盐等抗凝剂的新鲜或冷冻全血）。为了增加 DNA 产量，可以先进行白细胞分离（推荐用于白细胞分离的全血样本量为 1-2 mL）。
 

1. 将加热块设置为 55 °С，将装有洗脱缓冲液的小瓶放入加热块中。
2. 通过倒置彻底混合血液管，使内容物变得均匀。将 100 μL 全血移入干净的 1.5 mL 管中。
3. 将 300 µL 裂解液 BB和 10 µL 蛋白酶 К 添加到样品中，通过涡旋充分混合。
4. 在 55°C 下孵育管 15 分钟，偶尔涡旋（1-2 次）。
5. 将旋转柱放入收集管中。将裂解物添加到柱中。将色谱柱离心 45 秒。丢弃收集管并将离心柱放入干净的收集管中。
6. 加入 500 µL 清洗液 A，离心 30 秒。丢弃收集管并将离心柱放入干净的收集管中。
7. 加入 500 µL 洗涤液 B，离心 3 分钟。丢弃收集管。
8. 将旋转柱放入干净的 1.5 mL 微量离心管中。将 50–200 µL 洗脱缓冲液（预热至 55 °С）添加到离心柱膜的中心。在室温下孵育 2 分钟。将色谱柱离心 1 分钟。微量离心管包含纯化的 DNA。

从口腔拭子中纯化 DNA

1. 将加热块设置为 55 °С，将装有洗脱缓冲液的小瓶放入加热块中。
2. 将 300 μL 的 裂解液 BB添加到干净的 1.5 mL 微量离心管中。
3. 在Lysis Solution BB中彻底冲洗口腔拭子样本 。对管侧使用滚动动作，然后将棉签挤压到管侧，以尽可能多地去除液体。
4. 向样品中加入 10 µL 蛋白酶 К ，涡旋混匀。
5. 在 55°C 下孵育管 15 分钟，偶尔涡旋（1-2 次）。
6. 将旋转柱放入收集管中。将裂解物添加到柱中。将色谱柱离心 45 秒。丢弃收集管并将离心柱放入干净的收集管中。
7. 加入 500 µL 清洗液 A，离心 30 秒。丢弃收集管并将离心柱放入干净的收集管中。
8. 加入 500 µL 洗涤液 B，离心 3 分钟。丢弃收集管。
9. 将旋转柱放入干净的 1.5 mL 微量离心管中。将 50–200 µL 洗脱缓冲液（预热至 55 °С）添加到离心柱膜的中心。在室温下孵育 2 分钟。将色谱柱离心 1 分钟。微量离心管包含纯化的 DNA。

从培养的哺乳动物细胞中纯化 DNA

使用不超过 5×10 ^{6 个}细胞进行 DNA 纯化。
贴壁细胞培养：去除生长培养基，通过胰蛋白酶消化或选择的方法收获细胞。以 300 × g 离心细胞 5 分钟。去除上清液。在 100 μL 的 PBS 中重新悬浮细胞颗粒。将细胞悬浮液转移到干净的 1.5 mL 微量离心管中。
悬浮细胞培养：以 300 × g 离心 5 分钟收获细胞。去除上清液。在 100 μL 的 PBS 中重新悬浮细胞颗粒。将细胞悬浮液转移到干净的 1.5 mL 微量离心管中。
 

1. 将加热块设置为 55 °С，将装有洗脱缓冲液的小瓶放入加热块中。
2. 将 300 µL 裂解液 BB和 10 µL 蛋白酶 К 添加到样品中，通过涡旋充分混合。
3. 在 55°C 下孵育管 15 分钟，偶尔涡旋（1-2 次）。
4. 将旋转柱放入收集管中。将裂解物添加到柱中。将色谱柱离心 45 秒。丢弃收集管并将离心柱放入干净的收集管中。
5. 加入 500 µL 清洗液 A，离心 30 秒。丢弃收集管并将离心柱放入干净的收集管中。
6. 加入 500 µL 洗涤液 B，离心 3 分钟。丢弃收集管。
7. 将旋转柱放入干净的 1.5 mL 微量离心管中。将 50–200 µL 洗脱缓冲液（预热至 55 °С）添加到离心柱膜的中心。在室温下孵育 2 分钟。将色谱柱离心 1 分钟。微量离心管包含纯化的 DNA。

笔记

要增加 DNA 浓度，请使用较小体积的 洗脱缓冲液。不推荐使用体积小于 50 µL 的洗脱液，因为这不足以完全润湿膜，导致 DNA 回收率低。为提高 DNA 产量，请使用更高体积的 洗脱缓冲液(100–200 µL)。
预热至 55 °С 的洗脱缓冲液可促进结合 DNA 的最佳回收。使用平衡至室温的洗脱缓冲液进行洗脱也是可以接受的，但 DNA 回收率显着降低（高达 30–50%）。
为了最大限度地提高 DNA 回收率，建议进行两步洗脱。
如有必要，可以用去离子水洗脱 DNA。
测量 DNA 浓度时，仅使用试剂盒随附的TE 缓冲液 pH 8.5 或洗脱缓冲液稀释样品。否则，可能会错误地估计DNA 浓度和纯度（分别为 OD ₂₆₀和 OD ₂₆₀ /OD _{280 ）。}
纯化 DNA 的储存：长期储存 -20 °C，短期储存 +4 °С。