新冠病毒(Delta)S蛋白中和抗体ELISA检测试剂盒

产品介绍：
2019年底，严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2（Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2）开始肆虐全球，对全人类生命健康造成巨大威胁。该病毒通过刺突蛋白（Spike protein,S）受体结合域（Receptor Binding Domain,RBD）识别细胞表面受体-血管紧张素转化酶 2（Angiotensin I Converting Enzyme 2,ACE2）并与其结合，在相关蛋白协助和介导下侵染细胞。
本试剂盒可检测的中和抗体为针对新冠病毒(Delta)S蛋白并且可以阻断其与ACE2结合的抗体；本试剂盒可以检测任何物种体液中针对S蛋白的中和抗体。
本试剂盒预包被酶标板上Frdbio采用共价固定手段S蛋白RBD片段，其可以与Bio-ACE2偶联物特异性结合，然后通过HRP-链霉亲和素与标记生物素结合，最后通过TMB在HRP-链霉亲和素的HRP酶催化下显色；如果待检测样本或者标准品中含有针对S蛋白中和抗体会阻断Bio-ACE2偶联物与固定的RBD片段的结合，因此中和抗体含量与TMB显色值呈负相关。
Frdbio研发的新冠病毒(Delta)S蛋白中和抗体检测试剂盒可检测血清、血浆或其他体液中针对S蛋白的中和抗体，不受待检样品种属和抗体亚型的限制。
为方便行文，以下文中所提到的S蛋白皆为新冠病毒（Delta）S蛋白

试剂盒组成：

组分名称	规格	保存条件	数量
预包被酶标板（共价固定RBD片段）	96T	-20℃	1
阳性对照品(S蛋白中和抗体) （100×）	15ul/支	-20℃	1
阴性对照品(非相关抗体) （100×）	15ul/支	-20℃	1
HRP-ACE2偶联复合物（100×）	60ul	-20℃	1
通用稀释液	30ml	4℃	1
浓缩洗涤液（25×）	30ml	4℃	1
TMB底物液	12ml	4℃	1
底物反应终止液	12ml	4℃	1
酶标板覆膜			5
产品说明书			1

储存方法：
请按各个组分对应的温度存储，该试剂盒在各组分未拆封的情况下，自生产之日起可存放6个月以上。

试剂准备:
1.从冰箱中取出所有试剂，在使用前平衡至室温（20℃至 25℃）。 未用完后的所有试剂保存在冰箱中。
2.使用前应将所有样品和对照品进行离心。
3.HRP-ACE2工作液：将HRP-ACE2偶联复合物（100×）用  通用稀释液按 1：100进行稀释，即为HRP-ACE2工作液；
4.洗涤液：将 浓缩洗涤液（25×）用 ddH₂O 以体积比 1:24 进行稀释（稀释25倍），即为洗涤液。
Frdbio提示：如浓缩洗涤液（25×）中有沉淀，请在水浴（最高 50℃）中温育、混合至沉淀溶解。

待测样品和阴阳性对照品准备：
1.将阳性对照品和阴性对照品用 通用稀释液 以体积比 1:99 进行稀释，即稀释100倍。
例如，5μL 样品加入495μL 通用稀释液。
2.将待测样品用通用稀释液以体积比 1:9 进行稀释，即稀释10倍。
例如，10μL 测试样品加入90μL 通用稀释液。 
 

预包被酶标板准备及加样设计

1.阳性对照品和阴性对照品做两个平行重复孔，有条件的可以做三孔平行重复。
2.根据待测样品的数量抠取所需酶标板孔条（有条件的可以考虑样品做三次平行重复）。 确保板孔条牢固地卡入板框，未使用的板孔条及时装入有干燥剂铝箔袋密封-20℃保存。

检测操作步骤
1、将稀释好的阴性对照品、阳性对照和待测样品，分别加入酶标板孔，每孔50ul；
2.以上每孔中再立即加入HRP-ACE2工作液，每孔50ul,加完后震荡仪轻轻混匀；
3.用酶标板覆膜封盖板孔，在 37℃ 下孵育 60 分钟；
4.取下酶标板覆膜，用 350μL 的 洗涤液 洗涤酶标板孔3次；
5.洗涤完毕后在吸水纸上拍干孔内液体；
6.每孔立即加入100uL TMB底物液，室温显色10-15分钟，待其显色稳定后立即在每孔加入50uL底物反应终止液

吸光值读取
提前10分钟打开酶标仪，让其稳定
将显色反应终止的酶标板放入酶标仪，设定好检测波长450nm(最好设置双波长：设置450nm吸光波长，630nm为参考波长)；
Frdbio提示：TMB底物反应时间与温度有关，比较适宜温度为25℃左右；温度太低，反应速度慢，温度高，背景较深，边缘效应严重。

数据盒实验数据有效性判定：
阴性对照孔      OD₄₅₀（或OD₄₅₀/OD₆₃₀）>0.900
阳性对照孔      OD₄₅₀（或OD₄₅₀/OD₆₃₀）<0.300
本试剂盒典型数据：
阴性对照孔      OD₄₅₀（或OD₄₅₀/OD₆₃₀）=1.966
阳性对照孔      OD₄₅₀（或OD₄₅₀/OD₆₃₀）=0.102

待检测样品中中和抗体检测判定方法：
用抑制率来判定样本中抗SARS-CoV-2中和抗体的水平，公式如下：

抑制率 % = 阴性对照 OD 450- 待检测样品 OD 450 阴性样品 OD 450  ×100%
判定所参照的标准：
抑制率≥20% 判断结果为阳性 说明检出SARS-CoV-2中和抗体
抑制率＜20% 判断结果为阴性 说明未检出SARS-CoV-2中和抗体


*本试剂仅供实验室研究使用