DextrinBeads6FF的重力柱

DextrinBeads6FF的重力柱

Dextrin Beads 6FF的重力柱
货号：YA2510
规格：1x1mL/1x5mL/5x1mL/3x1mL+1x5mL/5x5mL
保存：2°C - 8°C
产品介绍
    Dextrin Beads 6FF是一种纯化带有麦芽糖结合蛋白（MBP）标签蛋白的亲和层析介质。MBP 可促进连接蛋白的正确折叠，增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。Dextrin Beads 6FF 可以一步纯化 MBP 融合蛋白，结合的融合蛋白可以用 10mM 麦芽糖进行温和洗脱，保护了标签蛋白的活性。如果要去除 MBP 融合部分可用位点特异性蛋白酶切除。
    Dextrin Beads 6FF 重力柱以Dextrin Beads 6FF 为装填材料，提供 1mL和 5mL两种规 格产品，方便客户使用，操作简单，纯化效率高。
产品性能（仅供参考）

性能	指标
基质	高度交联的 6%琼脂糖微球
配体	糊精
载量（/mL介质）	>10 mg MBP 蛋白(80 kDa)
粒径 (μm)	45-165
最大流速	0.3 MPa, 3 bar
pH稳定范围	3-12
储存缓冲液	含20%乙醇的1x PBS

基本操作信息（仅供参考） 
1 缓冲液的准备：
所用水和缓冲液在使用之前建议用 0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤。
1）平衡/ 洗杂液: 20mM Tris-HCl，200mM NaCl，1mM EDTA，pH7.4
2）洗脱液: 20 mM Tris-HCl，1mM EDTA，10mM 麦芽糖，pH7.4
注意: 平衡液和洗脱液中可加入 1mM DTT 或 10mM β–巯基乙醇
2 样品准备：
样品在上样前建议离心或用 0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
3 样品纯化：
柱子平衡——上样——洗杂——洗脱
4  SDS-PAGE 检测：
将使用纯化产品得到的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用 SDS-PAGE 检测纯化效果。
5  填料清洗
Dextrin Beads 6FF 纯化产品可以重复使用而无需再生，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，这时可按照下面方法对树脂进行清洗。
3 倍柱体积的去离子水；
3 倍柱体积的 0.1% SDS 或 0.5M NaOH 溶液；
3 倍柱体积去离子水，20%乙醇 4-30 度保存。
常见问题及解决方案（仅供参考）

1. 柱子反压过高：

可能是填料被堵塞，可以进行树脂清洗；或者是由于裂解液中含有微小的固体颗粒，建议上柱前使用滤膜 (0.22或 0.45μm) 过滤，或者离心去除。

2. 目的蛋白没有吸附：

1. 目的蛋白未表达，需要确保目的蛋白表达；
2. 样品或缓冲液中存在一些干扰因素如非离子去污剂，可以将样品透析或用平衡液稀释；
3. 细胞产生大量的淀粉酶影响结合力，可以在培养基中添加葡萄糖，抑制淀粉酶的表达；
4. 融合蛋白使麦芽糖结合位点阻塞或扭曲，影响了目的蛋白的结合力，此时建议更换载体；
5. 柱子结合时间太短，建议将样品与Dextrin Beads 6FF振荡孵育4度2小时或更长时间。

3. 洗脱样品较杂：

1. 目的蛋白降解，可以加一些蛋白酶抑制剂，如PMSF、EDTA等
2. 平衡/洗杂不充分，建议增加平衡液体积，确保树脂充分平衡/洗杂，如树脂太脏，则按照进行填料清洗。