退化神经元检测试剂盒

退化神经元检测试剂盒

 

 退化神经元检测试剂盒

货号：G3262
规格：3×10mL/3×50mL
保存：2-8℃，避光，有效期6个月
产品组成：

名称		3×10mL	3×50mL	保存
试剂(A):预处理液A（10×）		10mL	50mL	室温，避光
临用前取适当体积试剂A用90%乙醇稀释10倍后使用，稀释的工作液可冷藏保存48h，建议现配现用。
试剂(B):预处理液B（10×）		10mL	50mL	室温，避光
临用前取适当体积试剂B用蒸馏水稀释10倍后使用，稀释的工作液可冷藏保存48h，建议现配现用。
试剂(C):工作液	试剂(C1):储备液（10×）	1mL	5mL	2-8℃，避光
	试剂(C2):稀释液	9mL	45mL	2-8℃，避光
临用前取出试剂C1、C2复温至室温（25~30℃）后按照1：9的比例配制成工作液C，建议在4h内使用。

产品说明：
神经元变性的原因和影响是神经科学家们的主要关注点，目前已有多种检测神经元变性的方法，包括镀银染色和FJC染色方法。FJC 染色是近年来新兴的一种神经元荧光染色技术，不仅避免了常规镀银染色的繁琐和高成本，而且可以与其它荧光素标记物结合进行多重荧光染色。相较于其他染料，Fluoro-Jade C具有更高的信号背景比，以及更高的分辨率。这使其不仅可以定位神经细胞体的退化，还可以定位远端树突，轴突和末端。而且该染料具有高度抗褪色性，几乎与所有组织学处理和染色方案兼容。
退化神经元检测试剂盒（FJC法）可对退化神经元特异染色，本染色试剂盒提供成套的即用型试剂套装，可在简单稀释后，可直接用于实验，方便快捷。
自备材料：
  多聚赖氨酸载玻片、染色缸、盖玻片、中性树胶、恒温箱、系列乙醇、二甲苯
操作步骤：(仅供参考)
1. 冰冻切片浸于蒸馏水复温3min，石蜡切片脱蜡至水。
2. 切片自然晾干。
3. 浸入稀释好的试剂A工作液中5min，然后转入70%乙醇2min，然后蒸馏水浸洗2min。
4. 浸入稀释好的试剂B工作液中漂白10min。
5. 蒸馏水洗2min。
6. 将配好的试剂C工作液均匀滴加在处理后的脑切片上，室温避光孵育10min。
7. 蒸馏水洗三次，每次1min。
8. 晾干、透明（二甲苯1min），中性树胶封片。
9. 在荧光显微镜下观察。（使用蓝光或者488nm激光激发，FITC通道检测）
染色结果： 注意事项：
1. 该试剂盒可染色切片数量取决于单次染色容器大小。以能装5张切片的标准剥离染色缸为例，每50ml稀释好的试剂C工作液可以染色80-100张切片，滴染建议是400-600ul/张。稀释后的工作液不稳定，单次试验建议在4h内使用完毕，每次开始实验批次时，最好使用新稀释的试剂C工作液。
2. 试剂盒内试剂建议根据说明书标注保存温度分开保存，以免反复冻融对染色效果造成影响。
3. FJC为曙红类似物（着色红细胞），可能会对血管有一定染色效果，可以通过组织灌注或其他组织预处理步骤来有效避免血管染色，但可能无法完全消除。从测试结果来看，明显的形态学差异通常不会对结果判读造成影响。
4. 染色后清洗、封片、镜下观察的过程中注意避免强光照射。
5. 试剂原液或稀释液可能有少量沉淀，通常在稀释过程中会溶解，不影响染色结果。如有顾虑可用针头过滤器（水性滤膜）过滤后使用。
6. 通常建议使用正常小鼠脑切片作为阴性对照，应无明显染色。