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Staphylococcus aureus肠毒素 E 基因检

测试剂盒（PCR-探针法）
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  • ￥2750
  • YLKBIO
  • YLK-PCR0354
  • 国产
  • 2026年05月21日
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    • 详细信息
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    • 库存：

      100

    • 英文名：

      /

    • 保质期：

      1年

    • 供应商：

      优利科（上海）生命科学有限公司

    • 保存条件：

      -20℃

    • 规格：

      50T

    • 产品说明
    致病菌检测系列可针对食品、饲料等样品中的致病微生物的特异核酸片段进行扩增，仪器实时监测扩增过程中的荧光信号变化，自动判读结果。本产品用于Staphylococcus aureus肠毒素E型基因的检测。检出限为 101copies/μL 基因组 DNA。本试剂盒结果仅供科研参考。
    • 产品组成（96 测试）
     
    试剂 含量
    A-ent-E-P 1000μl × 2 支
    NG-P 100μl×2 支
    PG-ent-E-P 100μl×2 支
     
    • 适用仪器
    ABI 7500、CFX 96、Mx 3005P、LineGene9600 等实时荧光PCR仪。
    • 自备耗材和仪器
    ①冰盒；②移液器（0.5-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套灭菌吸头；③离心机；④涡旋混匀器；⑤金属浴；⑥均质机、搅拌机或研钵等研磨器具；⑦电子天平。


    产品细节图片1
    • 注意事项
      1. 本试剂检测灵敏度高。为了防止污染，实验要分区操作。
        1. 第一区：试剂准备区。
        2. 第二区：样本制备区。
        3. 第三区：扩增及产物分析区。
    ★ 分区之间最好进行物理性隔离，避免人为因素造成的污染。
      1. 实验过程中穿戴工作服和乳胶手套，使用移液器，试验产生的所有废弃物及时处理。
      2. 严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰上操作。
      3. 反应液中的成分对光敏感，应避光保存。试剂使用前要完全解冻，但应避免反复冻融，推荐使用前离心 30
    秒，并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。
      1. 反应结束后，扩增管请置于密封袋内丢弃，当日清理，开盖易造成气溶胶污染，禁止开盖。
      2. 不同批号试剂请勿混合使用，在有效期内使用。
    • 样品处理
    参照《GB 4789.10-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 Staphylococcus aureus检验》中的5.1处理样品，对样品进行前增菌，制备的菌液保存待用。
    称取25g样品至盛有225mL 7.5% 氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质杯内，8000-10000 r/min 均质1-2min，或放入盛有225mL 7.5% 氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1-2min。若样品为液态，吸取25mL样品至盛有225mL 7.5% 氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶（瓶内可预置适量无菌玻璃珠）中，振荡混匀。将上述样品匀液于36℃±1℃培养18h-24h。
    详细步骤请按照标准操作。


    产品细节图片2
    • 实验操作
    将试剂完全解冻，各组分离心 30s。
     
    1. 试剂配制（试剂准备区，放置于冰盒中进行）：
    若有 N 个待检样品，则参照下表，按照N+2 个数量计算各组分用量（N 个待检样品+1 个空白对照 NG+1 个阳性对照PG），涡旋混匀，离心 30 秒，分装于 PCR 管中。
    试剂 使用量
    A-ent-E-P 20×(N+2)μl
    反应液总体积 20×(N+2)μl
     
    1. 模板制备（样本制备区）
    建议使用病原微生物 DNA/RNA 提取试剂盒等商品化试剂盒，具体过程详见产品说明书。
    1. 添加模板（样本制备区，放置于冰盒中进行）
    向步骤 1 中已含有混合液的 PCR 管中分别加入 5μl 模板，顺序为空白对照 NG-P、待测样品模板、阳性对照
    PG-ent-E-P，离心 30 秒，立即进行扩增反应。
    1. 扩增反应（扩增及产物分析区）
    使用荧光定量PCR 仪，荧光基团选择 FAM，淬灭基团选择 NONE。按下列条件设置扩增反应：
      PCR 循环 荧光收集位点
    去污染 37℃ 10 分钟 1 个循环 —
    预变性 95℃ 1 分钟 1 个循环 —

    扩增    		 95℃ 15 秒 40 个循环 —
    60℃ 30 秒 ※
    1. 基线和阈值设定
    基线调整取 3-15 个循环的荧光信号，阈值线应超过空白对照扩增曲线的最高点。
    • 结果判定
    检测样品无Ct值或 Ct值≥40，曲线为直线或轻微斜线，无“S”型扩增曲线，可报告样品阴性，不含有Staphylococcus aureus肠毒素 E 型基因或含量低于检测限；
    检测样品Ct≤35，曲线呈“S”型扩增曲线，可直接报告样品阳性，含有Staphylococcus aureus肠毒素 E 型基因；
    检测样品 35＜Ct＜40，需进行一次重复实验，若Ct值≥40 则样品为阴性，不含有Staphylococcus aureus肠毒素 E 型基因或含量低于检测限；否则为阳性，含有Staphylococcus aureus肠毒素 E 型基因。
    ★ NG 反应为平滑直线，PG 反应为“S”型扩增曲线且 Ct 值＜30，此次检测结果有效，否则无效。如重复检测结果仍为无效，请与技术支持人员联系。

    产品细节图片3

    产品细节图片4
     

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