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- 2025年09月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
160
- 英文名：
Genetically Modified Plants Bar Gene Detection Kit
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
英文名称：Genetically Modified Plants Bar Gene Detection Kit
Bar 基因（Bialaphos resistance gene）,来源于土壤吸水链霉菌，编码膦丝菌素乙酰转移酶（PAT），该酶具有对除草剂草丁膦的耐受性，而被应用于水稻、大豆、玉米、小麦等作物改造中，获得大量草丁膦抗性作物。 本试剂盒适用于检测转基因植物的 Bar 基因，用于筛查待检测植物中是否含有 Bar 成分。
本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术，设计一对 Bar 基因特异性引物，结合一条特异性探针， 用荧光 PCR 技术对 Bar 基因的 DNA 进行体外扩增检测，从而达到快速检测之目的。
转基因植物 Bar 基因核酸检测试剂盒（探针法荧光PCR）试剂组成：
| 包装规格 | 50T/盒 |
| Bar 反应液 | 500μL×2 管 |
| 酶液 | 50μL×1 管 |
| Bar 阳性质控品 | 50μL ×1 管 |
| 阴性质控品 | 250μL ×1 管 |
储存条件及有效期：-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。
适用仪器：ABI7500、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
标本采集：称取 200g 样品。
保存和运输：采集或处理好的样品在 2℃~8℃条件下保存应不超过 24 h；若需长期保存，应放置-70℃以下保存，冻融不超过 3 次。
使用方法：
1. 样品处理（样本处理区） 1.1 样本前处理 固体样本：用粉碎机或冷冻研磨仪将样品研磨至细粉状。 1.2 核酸提取 推荐采用公司生产的核酸提取试剂（离心柱法）进行核酸提取，请按照试剂说明书进行 操作。 2. 试剂配制（试剂准备区） 根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 10 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表： 试剂 Bar 反应液 酶液 用量 19μL 1μL 将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，20μL/管。 3. 加样（样本处理区） 将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 5μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀， 短暂离心。 4. PCR 扩增（核酸扩增区） 4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内； 4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL； 荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。 4.3 推荐循环参数设置： 步骤 循环数 温度 时间 收集荧光信号 1 1 cycle 95℃ 2min 否 2 40 cycles 95℃ 15sec 否 60℃ 30sec 是 5. 结果分析判定 5.1 结果分析条件设定（请参照各仪器使用说明书进行设置，以分析 ABI7500 仪器为例） 反应结束后自动保存结果，根据分析后图像调节 Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值（用户可根据实际情况自行调整，Start 值可设在 3～15、End 值可设在 5～20，使阈值线位于扩增曲线指数期，阴性质控品的扩增曲线平直或低于阈值线），点击 Analyze 自动获得分析结果。 5.2 结果判断 阳性：检测通道 Ct 值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线； 阴性：样本检测结果 Ct 值>35 或无 Ct 值。 5.3 质控标准 阴性质控品：无特异性扩增曲线或无 Ct 值显示； 阳性质控品：扩增曲线有明显指数增长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。 6. 检测方法的局限性 1. 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关； 2. 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果； 3. 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果； 4. 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果； 5. 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果； 6. 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果； 7. 本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
注意事项
1. 所有操作严格按照说明书进行；
2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
3. 反应液应避光保存；
4. 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
5. 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
7. 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
8. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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文献和实验形DNA结构、Holliday结构等，故易出现假阳性；测序耗时长（1-3天），常常出现测序无信号等问题。 今年年初，Genloci通过植物基因工程表达产生高纯度的Cruiser™酶，它是一种具天然强活性的核酸内切酶，与CelⅠ同源。该酶能够高效特异地识别异源双链DNA的突变位点，并从突变位点的3’-端高效地切割异源双链DNA，不会出现假阳性。 今年6月，Genloci推出Cruiser™基因敲除检测试剂盒，该试剂盒可广泛应用于精确检测人、哺乳动物、细菌、真菌、病毒以及植物基因的敲除，尤其适用于ZFN
形DNA结构、Holliday结构等，故易出现假阳性；测序耗时长（1-3天），常常出现测序无信号等问题。今年年初，Genloci通过植物基因工程表达产生高纯度的CruiserTM酶，它是一种具天然强活性的核酸内切酶，与CelⅠ同源。该酶能够高效特异地识别异源双链DNA的突变位点，并从突变位点的3’-端高效地切割异源双链DNA，不会出现假阳性。今年6月，Genloci推出CruiserTM基因敲除检测试剂盒，该试剂盒可广泛应用于精确检测人、哺乳动物、细菌、真菌、病毒以及植物基因的敲除，尤其适用于ZFN
不过科研人员就没那么好运了，科研中需要用到定量PCR检测的目标广泛，不容易找到带有探针的定量检测试剂盒。当然，针对这种现状，几个大公司陆续推出探针库，比如罗氏的UPL通用探针库，就可以通过组合定量检测出人、大小鼠等7个物种的大部分ORF序列，特别适合大型实验室；ABI公司现在可以根据用户的需要提供约十二万种基因表达引物、探针和两百多万种SNP分析的引物探针进行科学研究，据说是源自于世界各地研究人员要求定制探针或者引物后汇总的结果，可惜就是贵，就连美国的实验室教授
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