- ￥2750
- YLKBIO
- YLK-PCR0353
- 国产
- 2026年01月17日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Canine Parvovirus and Canine Distemper Virus Detection Kit（Real-Time PCR Method）
- 保质期：
1年
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
【产品名称】
通用名称：犬细小病毒/犬瘟热病毒（CPV/CDV）核酸检测试剂盒（双重荧光 PCR 法）Name：Canine Parvovirus and Canine Distemper Virus Detection Kit（Real-Time PCR Method）
【包装规格】25T/盒、50T/盒
【预期用途】
犬细小病毒病和犬瘟热病毒病是分别由犬细小病毒(Canine parvoviruses,CPV)和犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)引起犬的两种烈性传染病。这两种疾病对犬(尤其是幼犬)会造成极高的致死率,给犬业养殖造成严重危害。CPV 自然感染的病例经常发生,即使进行 CPV 疫苗免疫后也会发病,幼犬的死亡率可达 20%-30%。CDV 能引起包括犬在内的多种动物发病,病死率高达 30-80%。因此对这两种疾病的准确诊断在兽医临床中具有重要的意义。本试剂盒适用于检测的犬肝、脾、肺等病变组织或泪液、鼻液、唾液、粪便等样本中犬细小病毒或犬瘟热 病毒，适用于这 2 种病原感染的辅助诊断。
【检验原理】
本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术，设计一对犬细小病毒和犬瘟热病毒基因保守区特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光 PCR 技术对犬细小病毒和犬瘟热病毒基因保守区的 RNA 进行体外扩增检测， 用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
【试剂组成】
| 包装规格 | 25T/盒 | 50T/盒 |
| CPV/CDV 反应液 | 500μL×1 管 | 500μL×2 管 |
| 酶液 | 25μL×1 管 | 50μL×1 管 |
| CPV/CDV 阳性质控品 | 50μL ×1 管 | 50μL ×1 管 |
| 阴性质控品 | 250μL ×1 管 | 250μL ×1 管 |
【储存条件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。【适用仪器】
ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。【标本采集】
病死犬可采集肝、脾、肺、等组织；活犬可采集血液、血清、泪液、鼻液、唾液、粪便。【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输， 严禁反复冻融。【使用方法】
- 样品处理（样本处理区）
- 样本前处理
-
- 核酸提取
- 试剂配制（试剂准备区）
10 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：
| 试剂 | CPV/CDV 反应液 | 酶液 |
| 用量（样本数为 N） | 20μL | 1μL |
- 加样（样本处理区）
- PCR 扩增（核酸扩增区）
- 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；
- 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；
-
- 推荐循环参数设置：
| 步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | 收集荧光信号 |
| 1 | 1 cycle | 42℃ | 20min | 否 |
| 2 | 1 cycle | 95℃ | 10min | 否 |
| 3 | 40 cycles | 94℃ | 15sec | 否 |
| 55℃ | 30sec | 是 |
- 结果分析判定
- 结果分析条件设定
-
- 结果判断
可疑：检测通道 35<Ct 值≤38，建议重复检测，如果检测通道仍为 35<Ct 值≤38，且曲线有明显的增长曲线， 判定为阳性，否则为阴性；
阴性：样本检测结果 Ct 值>38 或无 Ct 值。
- 质控标准
阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
- 检测方法的局限性
- 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
- 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
- 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
- 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
- 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
- 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；
- 本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
【注意事项】
- 所有操作严格按照说明书进行；
- 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
- 反应液应避光保存；
- 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
- 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
- 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
- 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
- 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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文献和实验PCR-SSCP法是在非这性聚丙烯酰胺凝胶上，短的单链DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同构象，一个碱基的改变将影响其构象而导致其在凝胶上的移动速度改变。其基本原理为单链DNA在中性条件下会形成二级结构，这种二级结构依赖于其碱基组成，即使一个碱基的不同，也会形成不同的二级结构而出刺同的迁移率。由于该法简单快速，因而被广泛用于未知基因突变的检测。用PCR-SSCP法检测小于200bp的PCR产物时，突变检出率可达70％-95％，片段大于400bp时，检出率仅为50％左右，该法可能
领域。例如，可以在PCR扩增中用同位素或荧光素等标记引物或核苷，也可以在电泳后用银染或溴化乙锭染色以显示结果。这里将重点介绍最常用的放射性同位素PCR-SSCP法。在进行PCR扩增特定靶基因序列时，利用γ-32P-ATP标记引物或直接在PCR反应体系中加入α-32P-dCTP进行PCR扩增，使扩增产物带有同位素标记物，然后将扩增产物变性为单链进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，放射自显影显示结果。利用引物标记或碱基掺入法使PCR扩增产物带有同位素标记物，均可使产物信号增强几个数量级。二者相比较，前者经济
在一个引物的5’端标记上生物素以便使其能与包被板上的亲合素结合而固定PCR产物，而在另一引物的5’端标记FITC，用HRP标记的抗FITC抗体与之结合显色，即可进行常规ELISA检测。如设立标准对照，此技术还可用于定量分析。 试剂与配置 包被液：4.3mmol/L Na2HPO4 , 1.4mmol/L K2 HPO4, 0.05% (w/v) Tween20, 40mmol/L NaCl, 2.7mmol/LKCl (pH7.2) 链霉亲和素（13U/mg, Sigma
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