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小肠结肠炎耶尔森氏菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

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  • ¥2750
  • YLKBIO
  • YLK-PCR0340
  • 国产
  • 2026年04月08日
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    • 详细信息
    • 文献和实验
    • 技术资料
    • 库存

      33

    • 英文名

      /

    • 保质期

      1年

    • 供应商

      优利科(上海)生命科学有限公司

    • 保存条件

      -20℃

    • 规格

      50T

    • 产品说明
    致病菌检测系列可针对食品、饲料等样品中的致病微生物的特异核酸片段进行扩增,仪器实时监测扩增过程中的荧光信号变化,自动判读结果。本产品用于对小肠结肠炎耶尔森氏菌进行检测。检出限为 103 CFU/ml。
    • 产品组成(50 测试)
    011212M
    试剂 含量
    A-YE-P 1000μl × 1 支
    NG-P 100μl×2 支
    PG-YE-P 100μl×1 支
    • 适用仪器
    荧光PCR 仪(如 ABI 7500)等可配套 0.2 mlPCR 八联管的PCR 扩增仪。


    产品细节图片1
    • 自备耗材和仪器
    ①灭菌 1.5mL 或 2.0mL 离心管;③冰盒;④移液器(1-10μL,10-100μL,100-1000μL)及配套灭菌吸头;⑤离心机;⑥涡旋混匀器;⑦金属浴;⑧均质机、搅拌机或研钵等研磨器具;⑨电子天平。
    • 注意事项
      1. 本试剂检测灵敏度高。为了防止污染,实验要分区操作。
        1. 第一区:试剂准备区。
        2. 第二区:样本制备区。
        3. 第三区:扩增及产物分析区。
    ★ 分区之间最好进行物理性隔离,避免人为因素造成的污染。
      1. 实验过程中穿戴工作服和乳胶手套,使用移液器,试验产生的所有废弃物及时处理。
      2. 严格按照操作步骤操作,试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰上操作。
      3. 反应液中的成分对光敏感,应避光保存。试剂使用前要完全解冻,但应避免反复冻融,推荐使用前离心 30
    秒,并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。
      1. 反应结束后,扩增管请置于密封袋内丢弃,当日清理,开盖易造成气溶胶污染,禁止开盖。
      2. 不同批号试剂请勿混合使用,在有效期内使用。
    • 样品处理
    参照《GB 4789.8-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 小肠结肠炎耶尔森氏菌检验》或其他标准处理样品,对样品进行前增菌,制备的菌液保存待用。
    详细步骤请按照标准操作。

    产品细节图片2
    • 实验操作
    将试剂完全解冻,各组分离心 30s。
    1. 试剂配制(试剂准备区,放置于冰盒中进行):
    试剂 使用量
    A-YE-P 20×(N+2) μL
    反应液总体积 20×(N+2) μL
     
    若有 N 个待检样品,则参照下表,按照N+2 个数量计算各组分用量(N 个待检样品+1 个空白对照 NG+1 个阳性对照PG),涡旋混匀,离心 30 秒,分装于 0.2ml PCR 管中。
    1. 模板制备(样本制备区)
    建议使用病原微生物 DNA/RNA 提取试剂盒等商品化试剂盒,具体过程详见产品说明书。
    1. 添加模板(样本制备区,放置于冰盒中进行)
    向步骤 1 中已含有混合液的 PCR 管中分别加入 5μl 模板,顺序为空白对照 NG-P、待测样品模板、阳性对照
    PG-YE-P,离心 30 秒,立即进行扩增反应。
    1. 扩增反应(扩增及产物分析区)
    使用荧光定量PCR 仪,荧光基团选择 FAM,淬灭基团选择 NONE。按下列条件设置扩增反应:
      PCR 循环 荧光收集位点
    去污染 37℃ 10 分钟 1 个循环
    预变性 95℃ 1 分钟 1 个循环

    扩增
    95℃ 15 秒 40 个循环
    60℃ 30 秒
    1. 基线和阈值设定
    基线调整取 3-15 个循环的荧光信号,阈值线应超过空白对照扩增曲线的最高点。
    • 结果判定
    检测样品无 Ct≥40,可报告样品阴性,不含有小肠结肠炎耶尔森氏菌或含量低于检测限;
    检测样品Ct≤35,曲线呈“S”型扩增曲线,可直接报告样品阳性,含有小肠结肠炎耶尔森氏菌;
    检测样品 35<Ct<40,建议重复实验。重复结果 Ct≥40 则样品为阴性,不含有小肠结肠炎耶尔森氏菌或含量低于检测限;否则为阳性,含有小肠结肠炎耶尔森氏菌。
    ★ NG 反应为平滑直线,PG 反应为“S”型扩增曲线且 Ct 值<30,此次检测结果有效,否则无效。如重复检测结果仍为无效,请与技术支持人员联系。

    产品细节图片3

    产品细节图片4

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