经典猪瘟病毒(CSFV)RNA 核酸检测试剂盒(恒温荧光法)

经典猪瘟病毒(CSFV)RNA 核酸检测试剂盒(恒温荧光法)

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  • ¥2750
  • YLKBIO
  • YLK-PCR0290
  • 国产
  • 2025年11月05日
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    • 详细信息
    • 技术资料
    • 库存

      100

    • 英文名

      /

    • 保质期

      1年

    • 供应商

      优利科(上海)生命科学有限公司

    • 保存条件

      -20℃

    • 规格

      50T

    经典猪瘟病毒(CSFV)RNA 核酸检测试剂盒(恒温荧光法)
     
    • 产品说明
    本试剂盒适用于猪活体及其脏器、血液、排泄物和细胞培养物中经典猪瘟病毒的特异检测,适用于经典猪瘟
    病毒(CSFV)的辅助诊断、监测及流行病学调查,检测结果仅供临床参考,检出限为 103copies/μl 基因组 RNA。
    • 产品组成(48 测试)
     
    试剂 含量
    A-CSFV-I 22μL× 48 管
    B-I 90μL × 1 支
    R-I 20μL × 1 支
    PG-CSFV-I 50μL × 1 支



    经典猪瘟病毒(CSFV)RNA 核酸检测试剂盒(恒温荧光法)
    • 适用仪器
    Dhelix 1610、ESE Tube Scanner、Genie II、Deaou-308C 等恒温荧光检测仪,ABI 7500,LightCycler480,CFX 96
    等荧光 PCR 仪。
    • 自备耗材和仪器
    ①灭菌 1.5mL 或 2.0mL 离心管;②冰盒;③移液器(0.1-2.5μL,0.5-10μL,10-100μL,100-1000μL)及配套灭菌吸头;④离心机;⑤涡旋混匀器;⑥金属浴
    • 注意事项
      1. 本试剂检测灵敏度高。为了防止污染,实验要分区操作。
        1. 第一区:样本制备区。
        2. 第二区:模板添加区。
        3. 第三区:扩增及产物分析区。
    ★ 分区之间最好进行物理性隔离,避免人为因素造成的污染。
      1. 实验过程中穿戴工作服和乳胶手套,不同区域独立使用工具,需更换手套和实验服。
      2. 严格按照操作步骤操作,试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。
      3. 反应液中的成分对光敏感,应避光保存。试剂使用前要完全解冻,但应避免反复冻融,推荐使用前离心 30
    秒,并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。
      1. 反应结束后,扩增管请置于密封袋内丢弃,当日清理,开盖易造成气溶胶污染,禁止开盖。
      2. 不同批号试剂请勿混合使用,在有效期内使用。
      3. 鉴于 CSFV 为一类检疫性疫病,上述操作应在相关生物安全设施内进行。对样品及其废弃物的操作应严格遵守生物安全规定。
      4. 本试剂盒仅供研究使用,不用于临床诊断。

    • 样品处理
    参照《GB/T 27540-2011 经典猪瘟病毒实时荧光 RT-PCR 检测方法》或其他相关标准采集样品,以下步骤可供参考。
    1. 样品的采集、处理和保存
    采样过程中样本不得交叉污染,采样及样品前处理过程中须戴一次性手套。
    1. 采样工具
    扁桃体采样器:鼻捻子、开口器和采样枪。使用前均应用 3%氢氧 钠溶液浸泡消毒 5 ~ 10 min,经清水冲洗。
     
    灭菌牙签和 0.5mL 或 1.5mL 离心管经(121+2)℃,高压灭菌 15 min;剪、镊经 160℃干烤 2h。


    经典猪瘟病毒(CSFV)RNA 核酸检测试剂盒(恒温荧光法)
    1. 样品采集
    1. 活体样品:固定活猪的上唇,用开口器打开口腔,用采样枪采取扁桃体样品,用灭菌牙签挑至 0.5mL 或
    1.5 mL 离心管并作标记,编号,送实验室。取待检样品,按 1:5 倍体积加入DEPC 水,于研钵或组织匀浆器中充分研磨,3000g 离心 15 min,取上清液转入离心管中编号备用。
    1. 内脏样品:采取病死猪各种脏器(淋巴结、胰脏、脾脏、回肠、肝脏和肾脏)装入一次性塑料袋或其他灭菌容器,编号,送实验室。取 50 mg~100 mg 待检样品,按 1:5 倍体积加人DEPC 水,于研钵或组织匀浆器中充分研磨,3 000g 离心 15 min,取上清液转入离心管中编号备用。
    (3)4%EDTA 抗凝血:用无菌注射器直接全血注入含 1/10 4%EDTA 溶液的无菌容器中充分混匀后编号备用。
    1. 排泄物:挑取少许粪便样本于离心管中,加入适量生理盐水,振荡混匀,室温 3 000g 离心 15 min,取上清液转入离心管中编号备用。其余液体排泄物直接转入离心管编号备用。
    2. 细胞培养物:细胞培养物冻融 3 次,转入离心管中编号备用。
    1. 样品存放与运送
    采集或处理的样品在 2~8℃条件下保存应不超过 24 h;若需长期保存,应放置-70℃冰箱,但应避免反复冻融(冻融不超过 3 次)。采集的样品密封后,采用保温壶或保温桶加冰密封,在 6~8 h 之内运送到实验室。按照《兽医实验室生物安全技术管理规范》进行样品的生物安全标识。
    • 实验操作
    1. 模板制备(样本制备区)
    建议使用病毒基因组DNA/RNA 提取试剂盒系列产品,具体过程详见产品说明书。
    1. 添加模板(模板添加区,放置于冰盒中进行)
    取出所需测试数的已含有反应液 A-CSFV-I 的 PCR 管,将试剂完全解冻,离心 30 秒,在管盖上标记管名(阴性对照管 NG、样品 XX、阳性对照管 PG)。打开管盖向各管管底分别加入 0.8μL B-I 及 0.2μL R-I,盖上阴性对照管管盖,其他各管分别沿管壁加入 2μL 模板,顺序为待测样品模板、PG-CSFV-I,依次盖好各管管盖,离心 30 秒, 立即进行扩增反应。
    1. 扩增反应(扩增及产物分析区)
    ①恒温仪器 63℃条件下反应 45 min。
    ②若使用荧光定量PCR 仪,则荧光基团选择 FAM,淬灭基团选择 None,将 63℃ 15 s,63℃ 45 s 作为一个循环,于 63℃ 45 s 处收集荧光信号,45 个循环。
    其他仪器请参照仪器说明书进行设置。
    • 结果判定
    ①仪器自动判定结果,若显示“阳性”,则样品中含有经典猪瘟病毒(CSFV);若显示“阴性”,则样品中不含有对经典猪瘟病毒(CSFV)或含量低于检出限。
    ②在荧光定量 PCR 仪上,根据有无“S”型扩增曲线判定结果。若有“S”型扩增曲线,则样品中含有经典猪瘟病毒(CSFV);若无“S”型扩增曲线,则样品中不含有经典猪瘟病毒(CSFV)或含量低于检测限。
    ★ NG 反应管结果显示“阴性”,PG 反应管结果显示“阳性”,此次检测结果有效,否则无效。如重复检测结果仍为无效,请与技术支持人员联系。

    经典猪瘟病毒(CSFV)RNA 核酸检测试剂盒(恒温荧光法)

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