- ￥2800
- YLKBIO
- YLK-PCR0157
- 国产
- 2026年01月17日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Diagnostic Kit for Xinjiang Hemorrhagic Fever Virus RNA(Real-Time RT-PCR Method)
- 保质期：
1年
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 保存条件：
-20℃±5℃，避光保存
- 规格：
50T
产品及特点
【包装规格】48T/盒
【预期用途】
本试剂盒适用于检测的疑似感染病人的静脉血等标本中新疆出血热病毒RNA，适用于新疆出血热病毒感染的辅助诊断。其检测结果仅供参考。
【检验原理】
本试剂盒用一对新疆出血热病毒特异性引物，结合一条特异性荧光探针，用一步法荧光RT-PCR技术对新疆出血热病毒RNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
【适用仪器】
ABI 、安捷伦MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列荧光定量PCR检测仪。
【标本采集】
疑似感染病人的静脉血2mL至EDTA-2Na抗凝管。
【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过6个月，标本运送应采用2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。
试剂组成
| 名 称 | 规格 |
| 酶液 | 50μL×1管 |
| XHFV反应液 | 1.0mL×1管 |
| XHFV阳性质控品 | 50μL×1管 |
| 阴性质控品 | 250μL×1管 |
注：不同批号试剂不能混用。
运输及保存
-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过5次，有效期12个月。
使用方法
- 样品处理（样本处理区）
- 样本前处理
- RNA提取
- 试剂配制（试剂准备区）
| 试剂 | XHFV反应液 | 酶液 |
| 用量 | 20μL | 1μL |
- 加样（样本处理区）
- PCR扩增（核酸扩增区）
- 将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内；
- 设置好通道、样品信息，反应体系设置为25μL；荧光通道选择：
- 推荐循环参数设置：
| 步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | 收集荧光信号 |
| 1 | 1 cycle | 42℃ | 20min | 否 |
| 2 | 1 cycle | 95℃ | 10min | 否 |
| 3 | 40 cycles | 94℃ | 15sec | 否 |
| 55℃ | 30sec | 是 |
| 成分 | 样品管 N+2 个 |
PCR 阴性对照管 | 标准曲线 样品管（2-7 管） |
| 2×Probe qPCR MagicMix |
10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
| 鼠疫耶尔森菌(鼠疫杆菌) qPCR 探针 |
1 μL | 1 μL | 各 1 μL |
| 鼠疫耶尔森菌(鼠疫杆菌) PCR 引物混合液 |
2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| N+2个待测 DNA 模板 | 7 μL | 不加 | 不加 |
| 超纯水 | 不加 | 7ul | 不加 |
| 第 7 步所得标准曲线样品稀释液（2-7 号） | 各7ul（2号样到2号管，3号样到 3 号管…） |
盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 3 min |
PCR 反应 （40 个循环） |
15ses | |
| 60℃ | 1 min（采集 FAM 通道的荧光信号） |
、数据处理
- 以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 RNA浓度的 log 值，再推算出其浓
小于 40 ，扩增曲线有明显起峰，则为阳性，否则为阴性。
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文献和实验一、基本原理 某些物质的分子能吸收能量而发射出荧光，根据荧光的光谱和荧光强度，对物质进行定性或定量的方法，称为荧光分析法（fluorescence analysis）。 荧光分析法具有灵敏度高、选择性强、需样量少和方法简便等优点，它的测定下限通常比分光光度法低2~4个数量级，在生化分析中的应用较广泛 在室温下分子大都处在基态的最低振动能级，当受到光的照射时，便吸收与它的特征频率相一致的光线，其中某些电子由原来的基态能级跃迁到第一电子激发态或更高电子激发态中的各个不同振动
时间分辨荧光分析法（Time resolved fluoroisnmunoassay,TRFIA）是近十年发展起来的一测微量分析方法，是目前最灵敏的微量分析技术,其灵敏度高达10-19，较放射免疫分析（RIA）高出3个数量级。 时间分辨荧光分析法（TRFIA）实际上是在荧光分析（FIA）的基础上发展起来的，它是一种特殊的荧光分析。荧光分析的利用了荧光的波长与其激发波长的巨大差异克服了普通紫外－可见分光
SABC ― Cy3 法免疫荧光组织化学染色步骤 在免疫荧光组织化学技术中，常用方法还有SABC-Cy3法。它的基本原理和染色步骤与免疫组织化学中SABC法大体相同，唯一不同的是亲和素―生物素―辣根过氧化物酶复合物中的酶组分被荧光素Cy3替代，从而形成亲和素―生物素-Cy3复合物，故称之为SABC―Cy3法。在其染色步骤中没有酶与底物和供氢体的显色作用，取而代之的是荧光素染色。由于Cy3所产生的荧光稳定性和敏感性好，而且SABC法放大系统效率高，所以，在样品抗原量少的情况下．此法
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