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- YLKBIO
- YLK-PCR0082
- 国产
- 2025年08月29日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Pseudorabies Virus(PrV) SYBR qPCR Kit
- 保质期：
1年
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
伪狂犬病病毒(Pseudorabies Virus，PrV) 会引起伪狂犬病，病猪的临床症状和病程随年龄不同而有很大差异：哺乳仔猪最为敏感，15日龄以内的仔猪常表现为最急性型，主要表现为体温升高、拉稀、发抖、运动不协调、流涎、颈部肌肉僵硬、四肢划水样运动，最后昏迷死亡；育肥猪则大多数伴有体温升高，呼吸困难，一般不发生死亡，耐过后呈长朗隐性感染带毒或排毒；成年猪常不呈现可见临床症状或仅表现为轻微体温升高，一般不发生死亡。母猪妊娠初期，可在感染后的20天左右发生流产，在妊娠后期，经常发生死胎和木乃伊，或者产出弱胎和死胎。在完成猪瘟净化的地区，伪狂犬病被认为是对经济影响最大的猪病毒病，因此伪狂犬病病毒的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用，为此本公司开发了简单快捷的伪狂犬病病毒染料法荧光定量PCR检测试剂盒，它具有下列特点：
- 即开即用，用户只需要提供病毒样品。
- 根据伪狂犬病病毒保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。
- 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
- 一管式荧光定量PCR检测，避免后续污染。
- 本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。
- 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
| 成分 | 十孔盒包装 |
| 2×qPCR MagicMix | 500μL（棕色管） |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL（黄盖） |
| 伪狂犬病病毒PCR引物混合物 | 100μL（白盖） |
| 伪狂犬病病毒PCR阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL) |
50μL（红盖） |
| DNA病毒裂解液（试用装） | 15次（9 mL） |
| 使用手册 | 1份 |
运输及保存
低温运输、-20℃保存，有效期一年。
自备试剂
DNA模板、10×ROX（根据机型决定，具体见使用方法）。
使用方法
一、稀释PCR阳性对照（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）
- 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
- 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
- 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液（最好用带芯枪头，下同）。
- 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
- 换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
- 换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
- 如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号（浓度为1×10E4 拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝）或第5号（浓度为1×10E5 拷贝/μL，10μL相当于10万拷贝）再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品，则PC和NC的体积也必须是200μL。
- 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的一管式病毒DNAout或其升级版柱式病毒DNAout。本试剂盒免费赠送15次一管式病毒DNAout
10.如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复，则反应设置数量相应增加2或3倍。
| 成分 | 样品管 N+2个 |
PCR阴性对照管 | PCR阳性 对照管（2-7管） |
| 2×qPCR MagicMix （棕色管） |
10 μL | 10 μL | 各10 μL |
| 伪狂犬病病毒PCR 引物混合液（白盖） |
2 μL | 2 μL | 各2 μL |
| 自备10×ROX (见注) | 2 μL | 2 μL | 各2 μL |
| N+2待测样品DNA模板 | 6 μL | 不加 | 不加 |
| 第7步所得PCR阳性对照 稀释液（2-7号） |
不加 | 不加 | 各6μL（2号样到2号管，3号样到3号管…） |
注:仅ABI7500、7700和7900仪器需要使用ROX作为对照，其他荧光PCR仪器（如iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000和LightCycler480）不需要使用ROX，则用水替代。
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 92℃ | 5分钟 |
| PCR反应 （30个循环） |
92℃ | 60 秒 |
| 58℃ | 60 秒 | |
| 74℃ | 60 秒 |
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文献和实验可分为荧光探针和荧光染料。荧光探针又包括Beacon技术（分子信标技术，以美国人Tagyi为代表）、 TaqMan探针（以美国ABI公司为代表）和FRET技术（以罗氏公司为代表）等；荧光染料包括饱和荧光染料和非饱和荧光染料，非饱和荧光染料的典型代表就是现在最常用的SYBR GreenⅠ；饱和荧光染料有EvaGreen、LC Green等。 嵌合荧光染料法（SYBR GreenⅠ）SYBR Green I是荧光定量PCR最常用的DNA结合染料，与双链DNA非特异性结合。在游离
实时荧光定量 PCR 技术（Quantitative Real-time PCR，简称 qPCR）是在 PCR 扩增过程中，通过实时监测荧光信号的变化，达到对待检测样本中初始模板定量分析的方法。当前 qPCR 技术被广泛应用于临床疾病诊断，动物疾病监测，食品安全分析等领域。随着 2020 年新冠疫情在全球的蔓延，qPCR 技术更是因其检测通量高，速度快，操作简便等优势成为新冠病毒核酸检测的有效方法被众人所熟知。 那么为了得到可靠、准确的检测结果，我们需要注意哪些方面呢？其实决定一次实验成功
如何获得高质量、高可信度的荧光定量PCR结果--高质量cDNA标准
过程，无RNA损失。这就需要裂解液即可迅速裂解细胞，高效的保护RNA，又不会影响高效反转录反应，且对于后续荧光定量PCR无抑制作用。FastLine细胞到cDNA快速制备试剂盒（KR105，TIANGEN），一站式完成从细胞到cDNA的快速制备，同时去除基因组DNA残留，整个操作流程仅需50 min，获得的cDNA不但可以直接进行荧光定量 PCR还可以和正常提取RNA后进行第一链反转录后得到的cDNA一样，冷冻保存供以后使用，是从少量细胞快速制备cDNA的最佳选择，并可实现高通量检测。 图
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