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- 2026年04月07日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Hendra Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)
- 保质期：
1年
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
商品名称：亨德拉病毒（HeV）核酸检测试剂盒（荧光-PCR法）
Name ：Hendra Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包装规格】48T/盒
【预期用途】
亨德拉病毒感染是由亨德拉病毒(Hendra virus, HeV)引起的人畜共患病。1994年因在澳大利亚亨德拉镇首次被分离而得名。最初被命名为马麻疹病毒，但后来的研究表明其分子学特征与麻疹病毒不同，因此改名为HeV。HeV属于副粘病毒科、副粘病毒亚科的亨尼帕病毒属。虽然HeV通常仅引起少量局部暴发，但该病毒宿主范围广,可以引起高致死性疾病,因此HeV感染受到广泛关注[1]。
本试剂盒适用于检测的疑似感染病人或马匹的静脉血等标本中亨德拉病毒RNA，适用于亨德拉病毒感染的辅助诊断。
【检验原理】
本试剂盒用一对亨德拉病毒特异性引物，结合一条特异性荧光探针，用一步法荧光RT-PCR技术对亨德拉病毒RNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断[2]。
【试剂组成】
| 名 称 | 规 格 |
| 酶液 | 50μL×1管 |
| HeV反应液 | 1.0mL×1管 |
| HeV阳性质控品 | 50μL×1管 |
| 阴性质控品 | 250μL×1管 |
1）不同批号试剂不能混用。
2）试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。
【储存条件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融少于5次，有效期12个月。
【适用仪器】
ABI 、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列荧光定量PCR检测仪。
【标本采集】
疑似感染动物或人的静脉血2mL至EDTA-2Na抗凝管。
【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过6个月，标本运送应采用2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。
【使用方法】
- 样品处理（样本处理区）
- 样本前处理
- RNA提取
- 试剂配制（试剂准备区）
| 试剂 | EMV反应液 | 酶液 |
| 用量 | 20μL | 1μL |
- 加样（样本处理区）
- PCR扩增（核酸扩增区）
- 将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内；
- 设置好通道、样品信息，反应体系设置为25μL；荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI系列仪器请勿选择ROX参比荧光，选择None即可。
- 推荐循环参数设置：
| 步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | 收集荧光信号 |
| 1 | 1 cycle | 42℃ | 20min | 否 |
| 2 | 1 cycle | 95℃ | 10min | 否 |
| 3 | 40 cycles | 94℃ | 15sec | 否 |
| 55℃ | 30sec | 是 |
- 结果分析判定
- 结果分析条件设定
5.2结果判断
阳性：检测通道Ct值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线；
可疑：检测通道35<Ct值≤38，建议重复检测，如果检测通道仍为35<Ct值≤38，且曲线有明显的增长曲线，判定为阳性，否则为阴性；
阴性：样本检测结果Ct值>38或无Ct值。
- 质控标准
阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且Ct值≤32；
以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
- 检测方法的局限性
- 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
- 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
- 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
- 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
- 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
- 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；
- 本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
【注意事项】
- 所有操作严格按照说明书进行；
- 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
- 反应液应避光保存；
- 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
- 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
- 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
- 实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
- 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
【参考文献】
[1] 于慧娜,蒋铭敏,王磊.亨德拉病毒感染. 预防医学情报杂质, 2008, 24(8):626~628.
[2] 姜涛,邓勇强,于曼,等.3种重要脑炎病毒的多重RT-PCR检测方法的建立. 军事医学科学院院刊, 2007, 31(3):281~286.
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