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- YLKBIO
- YLK-PCR0314
- 国产
- 2025年12月30日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Lactobacillus（LB） PCR Kit
- 保质期：
1年
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
乳酸杆菌（Lactobacillus，LB）是指能使糖类发酵产生乳酸的细菌，是一群生活在机体内益于宿主健康的微生物，它维护人体健康和调节免疫功能的作用已被广泛认可。乳酸杆菌属乳酸杆菌科，因发酵糖产生大量乳酸而命名，其存在广泛，嗜酸性，生存最适ph为5.5～6.0，在ph3.0～4.5的环境中仍然能生存，它在无芽胞杆菌中是耐酸力最强的。乳酸杆菌还可以用来治疗妇科炎症、儿童艾滋病、儿童糖尿病、畜禽肠道疾病等，具有较高的医疗价值，因此快速检测乳酸杆菌具有重要意义。荧光定量PCR是检测传染性疾病的主流技术，本产品就是以染料法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测乳酸杆菌的试剂盒，它具有下列特点：
- 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
- 引物和探针经过优化，灵敏性高。
- 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
- 特异性高，引物是根据人乳酸杆菌高度保守的VP1区设计，不会跟其他微生物的DNA发生交叉反应。
- 本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
- 本产品只能用于科研。
规格及成分
| 成分 | 十孔盒包装 |
| 2×Probe qPCR MagicMix | 0.5 mL（本色盖） |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL（黄盖） |
| 乳酸杆菌PCR引物 | 100 μL（白盖） |
| 乳酸杆菌qPCR探针 | 100 μL（棕色管） |
| 乳酸杆菌阳性对照2.0 (1×10E8拷贝/μL) |
50 μL（红盖） |
| DNA释放剂试用装 | 50次（试用装） |
| 使用手册 | 1份 |
运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。
自备试剂
样品DNA。
使用方法
稀释标准曲线样品（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
- 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
- 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
- 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
- 如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
- 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌DNAout或柱式细菌DNAout。本试剂盒免费赠送50次免DNA提取的DNA释放剂，本产品的裂解液可以直接作为PCR模板，省略了DNA提取步骤。
- 三、Probe qPCR反应（20μL体系，在样品制备室进行）
- 如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于标准曲线样品。
- 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）
成分 样品管
N+2个PCR阴性对照管 标准曲线
样品管（2-7管）2×Probe qPCR MagicMix（本色盖） 10 μL 10 μL 各10 μL 乳酸杆菌 qPCR探针（绿盖） 2 μL 2 μL 各2 μL 乳酸杆菌 PCR引物混合液（白盖） 2 μL 2 μL 各2 μL 待测样品DNA模板 6 μL 不加 不加 第7步所得标准曲线样品稀释液（2-7号） 不加 不加 各6μL（2号样到2号管，3号样到3号管…）
- 盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR：
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 10 s |
| PCR反应 （40个循环） |
95℃ | 5 s |
| 60℃ | 34 s（采集FAM通道的荧光信号） | |
| 72℃ | 0.5 min | |
| 最后延伸 | 72℃ |
|
数据处理
- 以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。电泳检测
如果有必要电泳确认，可取10-20 uL PCR产物直接在琼脂糖凝胶上电泳产物的大小为400 bp。但电泳非常容易污染实验环境，建议不轻易采纳。
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文献和实验做 real-time PCR之前，你应该如何着手设计引物？做哪些准备？看完必会！
过，你要先确定你选择哪个方法。如果你想用 Taqman Probe 法，请你选择 primer express 3.0。如果你想用 SYBR 法，我建议你选 primer premier 5.0。 为什么？请往下看。 3）两种引物设计软件之比较。 先说专门为 real-time PCR 定制的 primer express 3.0 。这个软件其实是为 Taqman 探针法设计的，而不适合SYBR染料法。 如果你用探针法，强烈推荐。打开软件就会发现，在方法选择的下拉菜单中
miRNA实时荧光定量PCR 实时荧光定量PCR从1996年美国Applied Biosystems公司推出实时荧光定量PCR技术以来，该技术已经越来越广泛的应用到各类RNA的研究中，成为研究RNA必不可少的实验手段之一。目前比较常用的方法有两种：（1）TaqMan荧光探针法：该方法在特异性探针的两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当探针完整时，荧光基团发光被淬灭基团吸收；在PCR扩增过程中，探针被降解，荧光基团与淬灭基团分离，发出可被检测到的荧光，以此来监测整个
实时荧光定量PCR从1996年美国AppliedBiosystems公司推出实时荧光定量PCR技术以来，该技术已经越来越广泛的应用到各类RNA的研究中，成为研究RNA必不可少的实验手段之一。目前比较常用的方法有两种：（1）TaqMan荧光探针法：该方法在特异性探针的两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当探针完整时，荧光基团发光被淬灭基团吸收；在PCR扩增过程中，探针被降解，荧光基团与淬灭基团分离，发出可被检测到的荧光，以此来监测整个PCR过程。（2）SYBR荧光染料法：该方法
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