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黄曲霉毒素M1 ELISA快速检测试剂盒

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  • 2025年07月16日
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    • 英文名：

      Aflatoxin M1

    • 规格：

      96孔

    黄曲霉毒素M1 ELISA快速检测试剂盒
    －－－北京中检维康技术有限公司

    1. 概要
    黄曲霉毒素是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性. 黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的代谢产物。经摄入含有黄曲霉毒素B1饲料的奶牛产出的牛奶中，其中便含有黄曲霉毒素M1。由于黄曲霉毒素M1相当稳定，巴氏灭菌法也无法将其杀灭，所以检测黄曲霉毒素M1不仅要在饲料原料中检测，而且在最终产品中也需要进行鉴定。
    Aflatoxin M1的检测方法有高效液相色谱法(HPLC)，薄层层析法(TLC)和酶联免疫吸附法(ELISA)等。
    用ELISA法可快速准确地检测牛奶，酸奶和奶粉中的Aflatoxin M1。
    原理
    本产品是利用免疫竞争法检测原理建立的一种定量检测试剂盒。具有简单、快速，无需特殊的仪器设备，既可以在实验室进行，也可在农场、饲料混合车间等实地进行测定。结果准确，灵敏度度为0.1ppb，准确率大于95% 。适用于牛奶，酸奶和奶粉中的Aflatoxin M1的检测。

    3. 试剂盒组成
    1）包被有抗原的96微孔板：1块（96 孔，12 条×8 孔）
    2）黄曲霉标准品：0 ng/ml 、0.1 ng/ml
    0.2 ng/ml、 0.5 ng/ml、 1.0 ng/ml、 2.0 ng/ml； 1 瓶 × 1.0ml
    3）200×黄曲霉抗体浓缩液： 1 瓶 × 0.20ml
    4）60× 酶标抗体浓缩液： 1 瓶 × 0.25ml
    5）10× 浓缩洗涤液： 1 瓶 × 50ml
    6）稀释缓冲液A： 1 瓶 ×25ml
    7）稀释缓冲液B： 2 瓶 ×50ml
    8）显色底物液： 1 瓶 ×13ml
    9) 反应终止液： 1 瓶 × 7ml
    10）试剂盒说明书
    4. 需要的仪器
    —酶标仪 450nm
    —高速离心机
    —微量移液器20μl～200μl，100μl～1000μl
    —刻度移液管
    —天平：感量0.01g
    —10ml离心管
    5. 酶联免疫分析程序
    5.1测定之前注意事项
    1) 使用前将所有试剂平衡至室温（20-25℃）。
    2) 使用后迅速将试剂放入2-8℃冷藏。
    3) 在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
    4) 所有孵育过程应避免阳光直射，并按要求用盖板覆盖住酶标板。
    5.2溶液的配制
    1）抗体的配置：根据实验所需的量用稀释缓冲液A将抗体浓缩液200倍稀释后使用
    2）酶标抗体的配置：根据实验所需的量用稀释缓冲液A将酶标抗体浓缩液60倍稀释后使用
    3）洗涤液的配制：将浓缩洗涤液用去离子水稀释10倍后使用（1份浓缩洗涤液加9份蒸馏水）
    5.3测定程序
    1）将足够标准品和样品所用数量的孔条插入酶标板架，标准品和样品做两个平行实验，记录下标准和样品的位置。未使用的酶标板用铝箔袋封好置2-8℃冷藏保存。
    2）分别吸取50μl 标准品和样品加至相应的微孔（双孔）中，然后再各加入50μl 稀释后的抗体，装入袋中密封，在37℃温育20min。
    3）倒出孔中的液体，每孔加入250μl 稀释好的洗涤液洗涤，重复操作四次。洗板时每次间隔30s，洗完后用力在吸水纸上排干。
    4）每孔加入酶标抗体100μl，装入袋中密封，37℃温育20min。
    5）重复步骤3，反复洗涤四次。
    6）每孔加入100μl显色底物液，装入袋中密封，37℃避光温育15min。
    7）每孔加入50μl 反应终止液，混匀。
    8）测量O.D.450nm 值。测定2－3次，取平行较好数值用于计算。
    6. 结果判定
    1）所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以第一个标准（0标准）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。
    百分吸光度值（%）＝
    B
    ×100%
    B0
    以黄曲霉标准品浓度值（ppb）为X轴，百分吸光度值为Y轴，绘制标准曲线图。相对应每一个样品的浓度可以从标准曲线上读出。也可以用回归方程法，计算出样本溶液浓度。利用计算机专业软
    件，更便于大量样品的快速分析。
    7. 注意事项
    1）室温低于20℃或试剂及标本未回到室温（20- 25℃）会导致数值偏低。
    2）在洗板过程中如果出现板孔干燥过久的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板排干后应立即进行下一步操作。
    3）标准物质和显色液对光敏感，避免直接暴露在光线下。
    4）混合要均匀，洗板要彻底（包括加样品和标准液的时候都必需充分混合均匀）。
    5）反应停止液为强酸性物质，避免接触皮肤。
    6）不要使用过了有效期的试剂盒，也不要稀释或搀杂使用不同生产厂家的试剂盒这样会引起灵敏度降低。
    7） 试剂盒的储存条件是2-8℃，切勿冷冻。
    8. 检测方法灵敏度、准确度、精密度
    1）试剂盒灵敏度: 0.1 ppb
    2）检测限：牛奶0.1ppb---2ppb
    酸奶0.2ppb---4ppb
    奶粉 1ppb---20ppb
    3）试剂盒变异系数：小于20%。
    4）试剂盒准确度：回收率范围在80％-110％之间。

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    相关实验

    • 乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的检测方案

      M1。 3. 所需设备和耗材 黄曲霉毒素免疫亲和柱：Welchrom® IAC (1ml，25支/盒；3ml，15支/盒)（上海月旭提供）；高效液相装置带荧光检测器；均质机；水平振荡器；SPE转接头及50ml大容量上样器：Welchrom® SPE Adapter（上海月旭提供）；分析天平（精度0.02 g)；SPE装置带抽真空系统：Welchrom® SPE Device（上海月旭提供）；黄曲霉毒素M1标准品；PBS 缓冲溶液：称取1.16 g Na2HPO4，0.20 g KH

    • 黄曲霉毒素

      某些黄曲霉和寄生曲霉产生的一种肝毒素。它对动物有极强的毒性和高度的致癌性。目前已分离出B1 、 B2 等 12种衍生物，其中以 B1 的毒性最强。各种黄曲霉毒素的结构相似，都含有 1个糠酸呋喃的基本毒性结构和 1个氧杂萘邻酮结构。纯黄曲霉毒素不溶于水、乙烷、乙醚、石油醚等，而溶于氯仿、甲醇、苯、丙酮等有机溶剂。 1960年英国曾发生震动世界的 10万只火鸡突然死亡的事件，就是因为饲料中有黄曲霉毒素，其中毒症状为食欲不振，走路摇摆，羽翼下垂，昏睡， 1周左右死亡。解剖检查，见肝

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      曲霉属黄曲霉产生的菌类毒素。 1960年英国在数月内约死掉十万只火鸡，经过研究证实，是由繁殖在花生粗粉饲料中的黄曲霉产生的毒素所致。用紫外线照射黄曲霉毒素，可发出青和绿的四种相类似的荧光物质，为了区别，分别称为 B1 、 B2 、 G1 、 G2 ，并明确了它们的化学结构。它也是引起肝脏病变的致癌物质。由于考虑到黄曲霉是日本酿造品中广泛使用的米曲霉的野生种，因而以曲霉属为中心，对该毒素的生产性进行了广泛的调查，虽有类似的物质，但经过对动物的实验，未能确定其毒性。此外，最初被鉴定

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