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文献和实验亲和层析的实验操作和一般柱层析类似，都包括：装柱、上样、洗脱、样品收集、结果处理等步骤。溴化氰活化琼脂糖用于配体固相化是实验室亲和层析最常用的技术之一，该方法简便廉价，并广泛应用于蛋白质、核酸、凝集素等。下面以此为例介绍亲和层析的实验方法：试剂与配制1.Sepharose 4B2.CNBr（剧毒）3.抗原或抗体4.1Mol/L NaHCO3 取NaHCO3 84.01g加水至1 000ml。5.0.1Mol/L NaHCO36.2Mol/L NaOH7.0.01Mol/L pH7.4 PBS
一．实验目的 学习一种人工合成模拟过氧化物酶的方法，了解柱子型固定酶的原理以及感性认识酶分析法的一些应用。 二．实验原理 过氧化物酶的辅基是血红素。在体外将血红素与牛血清白蛋白结合制备成含血红素的蛋白质分子作为模拟过氧化物酶。在确定血红素与牛血清白蛋白结合后，检测其的过氧化物酶活性。然后将此人工模拟酶固定在载体琼脂糖凝胶（Sepharose 4B）上并装柱，应用于检测样品中痕量过氧化氢的含量，因为过氧化氢的测定
浓度大于0.05Mol/L时，对蛋白质几乎没有非特异性吸附。琼脂糖凝胶极易被溴化氢活化，活化后性质稳定，能经受层析的各种条件，如0.1Mol/L NaOH或1Mol/L HCl处理2h~3h及蛋白质变性剂7Mol/L尿素或6Mol/L盐酸胍处理，不引起性质改变，故易于再生和反复使用。 琼脂糖凝胶微球的商品名为Sepharose，含糖浓度为2%、4%、6%时分别称为2B、4B、6B。因为Sepharose 4B的结构比6B疏松，而吸附容量比2B大，所以4B应用最广。 （三）试剂与配制
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