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细胞系
100万
细胞系
肺癌
镜像绮点
100万
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A549-luc
贴壁培养
长期
冻存/复苏
肺
肺癌
上皮细胞样
否
组织
肺癌
肺
T25
细胞介绍
该细胞系由D.J.Griad通过肺癌组织移植培养建系,患者为58岁白人男性。A549能通过胞苷二磷酸胆碱途径合成含有高含量不饱和脂肪酸的卵磷脂。
该细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。
细胞特性
1) 来源:肺癌
2) 形态:上皮细胞样,多角形;贴壁生长
3) 含量:>1x106 细胞数
4) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
5) 用途:仅供科研使用
细胞筛选
该细胞为稳定转染Luc的细胞,随细胞传代次数的增加,其Luc荧光强度会逐渐减弱。若实验要求需要维持荧光强度,可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。
建议收到细胞后至少传3代,冻存留种后再进行筛选。
初次进行细胞筛选时,建议加入终浓度为1ug/ml嘌呤霉素的完全培养基维持培养,若无细胞漂浮或者漂浮较少,即可更换为含2ug/ml嘌呤霉素的完全培养基继续筛选,以此类推,至最高药物浓度为5ug/ml。若筛选过程中,漂浮细胞大于60%,则停止筛选,换成正常培养基培养,至细胞密度约80%,可继续加入同浓度嘌呤霉素进行筛选。当加入5ug/ml嘌呤霉素时细胞正常增殖,可停止筛选,用不含药完全培养基正常培养。
细胞诱导构建实验步骤:
1. 转染 (1)将A549细胞接种6孔板,每孔细胞数约为1×105 个,
(2)第二天,细胞融合度为50%左右时用于病毒转染,
(3)加入1mL完全培养基,再加20 μL Luciferase过表达慢病毒,
(4)混匀后继续培养,
(5)12h后观察细胞状态,并更换为新鲜培养基,
(6)当细胞长满板底后,传代至T25培养瓶中。
2. 筛选:用嘌呤霉素4ug/mL抗性筛选6周,稳转细胞记作A549+Luc。
3. 体外荧光素酶活性检测
取A549细胞消化,离心,弃上清,加20μL细胞裂解液,再加100μL荧光素酶底物,检测发光情况。
发光值 |
|
阴性 |
105 |
实验组 |
18995 |
结果表明慢病毒感染A549细胞能稳定表达荧光素酶。
运输和保存
干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的处理
1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 。
一.细胞培养准备培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备F-12K(推荐iCell-0007)培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
人巨核细胞白血病细胞 | DAMI | 1640+10%FBS+1%P/S | 悬浮+贴壁(少量)生长 |
人髓母细胞瘤细胞 | DAOY | MEM+10%FBS+1%P/S | 贴壁生长 |
人Burkitt's淋巴瘤细胞 | DAUDI | 1640+10%FBS+1%P/S | 悬浮生长 |
人弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞 | DB | 1640+10%FBS +1%P/S | 悬浮生长 |
人结直肠腺癌细胞 | DLD-1 | 1640+10%FBS+1%P/S | 贴壁生长 |
人肺癌细胞 | DMS 53 | Waymouth's MB 752/1 medium (Invitrogen, 11220-035)+10%FBS+1%P/S | 贴壁生长 |
人小细胞肺癌细胞 | DMS 114 | 1640+10%FBS+1%P/S | 贴壁生长 |
人前列腺癌细胞 | DU145 | MEM+10%FBS+1%P/S | 贴壁生长 |
人乳腺上皮细胞 | DU4475 | 1640+10%FBS+1%P/S | 悬浮生长 |
人脐静脉细胞融合细胞 | EA.hy926 | DMEM(含NaHCO3 1.5g / L)+10%FBS +1%P/S | 贴壁生长 |
人食管癌细胞 | Eca-109 | 1640+10%FBS+1%P/S | 贴壁生长 |
人膀胱癌细胞 | ECV-304 | M199+15%FBS+1%P/S | 贴壁生长 |
人膀胱癌细胞 | EJ-1[EJ1] | MEM+1% L-谷氨酰胺+1%NEAA+10%FBS+1%P/S | 贴壁生长 |
人卵巢透明细胞癌细胞 | ES-2 | McCOY's 5A +10%FBS+1%P/S | 贴壁生长 |
人腺癌细胞系 | F56 | DMEM+10%FBS+1%P/S | 贴壁生长 |
人咽鳞癌细胞 | FADu | MEM+10%FBS+1%PS | 贴壁生长 |
人甲状腺癌细胞 | FTC-133 | 1640+10%FBS +1%P/S | 贴壁生长 |
人胆囊癌细胞 | GBC-SD | 1640+10%FBS+1%P/S | 贴壁生长 |
人胆囊癌细胞荧光素酶标记 | GBC-SD+LUC | 1640+10%FBS+1%P/S | 贴壁生长 |
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