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【PBMC人源化小鼠模型介绍】

      PBMC（外周血单个核细胞）人源化小鼠模型是一种常用的免疫系统人源化动物模型，通过将人源PBMC移植到免疫缺陷小鼠体内，用于研究人类免疫细胞功能、肿瘤免疫治疗、自身免疫疾病或移植物抗宿主病（GVHD）等。

实验原理

    PBMC人源化小鼠模型利用免疫缺陷小鼠（如NSG、NOG等）缺乏功能性T/B/NK细胞的特点，通过移植人外周血单个核细胞（含T/B/NK/单核细胞等），在小鼠体内重建人类免疫系统。该模型优势在于操作简单、周期短（4-8周），但可能因GVHD导致小鼠存活时间较短（6-12周）。

实验步骤 

1. PBMC的分离与准备

1. 采集健康人外周血于肝素抗凝管中。

2. Ficoll密度梯度离心（1500-2000 rpm, 20-30分钟），吸取白膜层（PBMC）。

3. PBS洗涤2-3次，重悬于PBS或无菌生理盐水（细胞浓度调整至5-10×10⁶/100 μL）。

2. 小鼠预处理

• 辐照预处理（可选）：
  部分实验会对小鼠进行亚致死剂量辐照（1-2 Gy），以增强移植效率，但可能加速GVHD。

• 直接移植：NSG/NOG小鼠通常无需预处理。

3. PBMC移植

• 移植途径：

  • 尾静脉注射：最常用，100-200 μL PBMC悬液（5-10×10^6细胞/鼠）。

  • 腹腔注射：效率略低，但操作简单。

• 移植时间：通常在Day 0一次性注射，或分次注射（如Day 0、7）。

4. 移植后监测

1. 1. 嵌合率检测：

      • 移植后2-4周取小鼠外周血/脾脏，通过流式检测人CD45+细胞比例（成功模型通常>20%）。

   2. GVHD评估：

      • 观察体重下降、活动减少、毛发蓬松、腹泻等症状。

      • 组织病理学检查（肝、肺、肠道等器官的淋巴细胞浸润）。

   3. 实验终点：

      • 根据研究目的设定（如肿瘤接种后抗肿瘤效果评估）。

应用场景

1. 肿瘤免疫治疗：评估PD-1抗体、CAR-T细胞等疗效。
2. 感染性疾病：研究HIV、EBV等病毒感染免疫应答。
3. 自身免疫病：如类风湿性关节炎、GVHD机制研究。