主动脉外膜成纤维细胞_大鼠原代细胞

实验动物的灌注固定原理和技巧

1% 肝素钠 0.2ml 后经左心室行主动脉插管， 血管钳固定后剪开右心耳，先以生理盐水 150ml 快速冲洗血管，然后用4%多聚甲醛的 0.01mol/LPBS（4℃，PH7.40）250ml 灌注固定，先快后慢，共需时间为 50min，之后取材，置4%多聚甲醛固定液后固定，在 4℃ 冰箱内保存。多聚甲醛进入大鼠体内，大鼠会出现四肢、尾的抽搐，最终以肝脏发白、内脏鼓起即灌注好。 三、脑组织免疫组化实验 1. 灌注固定用的针头，一般都用注射针头。灌注大鼠一般可用10到12号针头，小鼠可用 6、7 号针

大鼠主动脉内皮细胞的培养

材料与方法： 材料 : 培养皿、培养瓶、烧瓶、试管，玻璃针等。 眼科剪、眼科镊、手术刀片。 5%CO2孵箱、PH计。 恒温水浴箱。 PMi1640培养基，D-Hank’s缓冲液 、胎牛血清，内皮生长因子（ECGF），青霉素，链霉素,戊巴比妥钠等。 方法： 1、取材：4～6ｗＷｉｓｔａｒ大鼠, 大剂量2%戊巴比妥钠麻醉处死，将处死后的大鼠浸入75%酒精中，放入超净台。在无菌状态下剪开胸腹腔，分离胸主动脉,用2ｍｌ注射器从主动脉弓处向胸主动脉注入D-Hank’s液,驱除残血,取主动脉

平滑肌细胞培养方法

处死Wis-tar大鼠，无菌条件下分离全段主动脉，立即置于含青霉素100u/ml，链霉素100mg/ml的无菌生理盐水中。每次取材2~3只大鼠。贴壁法原代培养：超净工作台上，清除结缔组织，剥除动脉外膜。纵向剖开血管，用眼科弯镊钝性刮除内膜面，以去除内皮细胞，剩余血管中膜组织较薄、透明、韧性好。用含青、链霉素的生理盐水反复冲洗，去除脂滴、血凝块等杂质及可能残留的内皮细胞和外膜成纤维细胞，然后将一次取材的2~3条血管的中膜组织混合在一起，置于无菌培养皿中。滴加少许培养液使组织保持湿润，用眼科弯剪