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文献和实验vg)下,可高效转导大 脑皮层、纹状体、小脑 Purkinje 细胞等 CNS 神经元,转导率高达 69%(皮层)和 76%(Purkinje 细胞),比 AAV-PHP.B 效率提升 2.5 倍以上。 AAV-PHP.S 基于 AAV9 进化,可高效转导背根神经节(DRG)、心脏神经节、肠道神经系统(ENS)等 PNS 神经元,DRG 神经元转导 率高达 82%。 图 5 AAVPHP.B、AAVPHP.eB、AAVPHP.S 可实现外周和中枢神经系统的转导 [Nat Neurosci
称为原代细胞培养,适合用腺病毒感染。由于细胞增长缓慢,病毒感染效率较低,因此需要进行 MOI 梯度摸索实验,选择适合的 MOI 进行实验,从而提高病毒感染效率(MOI 摸索实验参考第一部分第四小节)。 原代细胞培养和感染注意事项: 1、由于原代细胞增长缓慢,使用腺病毒感染,可以在接种时提高汇合度到 50-60% 左右,确保在感染后 2 天时细胞汇合度达到 90~100%。感染非分裂细胞如神经元细胞,接种后不再增殖,可按照 100% 的汇合度进行接种。 2、若使用慢病毒感染原代细胞,建议接种时细胞
左:尚恩-大鼠原代皮层神经元细胞-未成熟-48h 右:尚恩-大鼠原代皮层神经元细胞-成熟-96h 面对这些或主动、或被动的分化现象,我们不禁要问:究竟是什么力量在背后操控着细胞的命运?答案就在于我们提供的培养环境。 四、决定细胞分化状态的关键因素 面对这些或主动或被动的分化现象,细胞的命运很大程度上取决于我们提供的培养环境: 细胞外基质:分化状态的细胞需要合适的包被条件。例如,肝细胞在塑料皿上很快去分化,但在胶原
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