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- 2025年12月23日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 品系：
大鼠脑微血管内皮细胞永生化
- 细胞类型：
大鼠脑微血管内皮细胞永生化
- 肿瘤类型：
/
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 库存：
100
- 英文名：
/
- 生长状态：
贴壁生长
- 年限：
永久
- 运输方式：
快递形式
- 器官来源：
大鼠脑微血管内皮细胞永生化
- 是否是肿瘤细胞：
/
- 细胞形态：
正常
- 免疫类型：
/
- 物种来源：
大鼠脑微血管内皮细胞永生化
- 相关疾病：
/
- 组织来源：
大鼠脑微血管内皮细胞永生化
- 规格：
5*10^5
脑微血管内皮细胞是血脑屏障的主要组成成分，能够限制可溶性物质和细胞等从血液进入大脑。大脑微血管内皮细胞与外周内皮细胞相比具有一些相同特性。
脑微血管内皮细胞存在许多细胞间紧密连接，产生很高的跨内皮阻抗，延迟细胞旁的通量；脑微血管的内皮细胞间衔接得十分紧密，不象其他组织的血管内皮细胞那样有较大的缝隙脑微血管内皮细胞缺乏内皮细胞的窗孔结构，其液相物质胞饮水平较低；脑微血管内皮细胞具有不对称定位酶和载体介导转运系统，从而产生 “两极分化”的表现型。 与外周内皮细胞相同，大脑微血管内皮细胞表面表达细胞粘附分子，调控白细胞进入大脑。由于微血管内皮细胞的器官特异性，内皮细胞通常取源于疾病研究的相关组织。
细胞中文名称：大鼠脑微血管内皮细胞永生化
细胞英文名称：
形态特性：铺路石状细胞，不规则细胞
生长特性：贴壁培养
细胞特性
1) 组织来源于实验动物的脑组织。
2) 细胞鉴定：血管假性血友病因子（vWF）免疫荧光染色为阳性。
3) 经鉴定细胞纯度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
5) 细胞生长方式：铺路石状细胞，不规则细胞，贴壁培养。
1、 细胞传代：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；
2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 完全培养
液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min；
3）弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 完全培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代，最后放入 37℃， 5%CO2 细胞
培养箱中培养；
2、 细胞冻存：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；
2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终
止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min；
3）用适量的冻存液（FBS： DMSO=9 ： 1）重悬细胞，并放置于冻存管中；
4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜， 24h 后转入液氮中进行长期保存。使用程序
降温盒可直接放入-80℃。
3、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结
晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2）将冻存管中的细胞移至含 6ml 完全培养基的 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min；
3）弃上清，沉淀用 6ml 完全培养基重悬，接种 25cm2 培养瓶，于 37℃， 5%CO2 细胞培养箱中培养
大鼠脑微血管内皮细胞永生化收到后处理
细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液移入废液缸中，悬浮细胞需离心处理，加入6ml新鲜完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤说明书。
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文献和实验体外培养模型已被广泛应用于血脑屏障的研究、脑血管疾病的病理生理及分子生物学研究、新药筛选、脑微血管内皮细胞生理生化及药理学研究等领域。而大多数体内实验采用大鼠为动物模型，而且大鼠具有较多的细胞生物学研究所需的抗体可用，因此进行大鼠脑微血管内皮细胞的培养具有重要的意义。自从Panula等[2]首次成功培养大鼠脑微血管内皮细胞以来，国内外有关大鼠脑微血管内皮细胞的分离和培养方法已有较多的报道，我们发现国内的方法多以组织匀浆、两次尼龙网过滤分离脑微血管段为主[3,4]，也有采用酶消化、梯度离心及尼龙网过滤
实验材料： 1. 正常兔大脑皮质组织； 2. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.2； 3. M199培养液（含20%小牛血清、肝素25U/ml、HEPES 10mmol/L、100IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素）；D-Hanks液；0.05%胰蛋白酶溶液；0.05%胶原酶溶液；15%右旋糖苷（用Hanks配制，pH7.4）； 4. 匀浆器、手术刀、解剖剪、解剖镊、眼科剪，眼科
V asc B iol, 1995, 15 (7) : 903～ 909. [ 3 ] 钱志远, 黄 强, 周丽英, 等. 鼠脑微血管内皮细胞的分离与长期培养[J ]. 细胞生物学杂志, 1999, 21 (1) : 42～ 45. [ 4 ] 王建民, 施永德, 步燕芳, 等. 大鼠脑血管内皮细胞的分离培养与形态学观察[J ]. 解剖学杂志, 1998, 21 (6) : 495～ 499. [ 5 ] 刘鼎新, 吕证宝. 细胞生物学研究方法与技术[M ]. 北京: 北京医科大学, 中国
