鸡气管黏膜上皮细胞永生化

鸡气管黏膜上皮细胞永生化
 

气管以软骨、肌肉、结缔组织和黏膜构成。软骨为"C"字形的软骨环，缺口向后，各软骨环以韧带连接起来，环后方缺口处由平滑肌和致密结缔组织连接，保持了持续张开状态。在近端下呼吸道的上皮表面，主要是纤毛上皮细胞，它与基底细胞及杯状细胞一起构成假复层上皮，到达气管腔表面的大部分细胞为纤毛上皮细胞，基底细胞与基底膜相连，通过半桥粒固定于上皮，在远端下呼吸道中，Clara细胞和基底细胞占优势，纤毛细胞已不存在，杯状细胞数量减少，上皮形态更象柱状，整个上皮存在于一薄层基底膜上，通过间质结缔组织组成的网状层相互支撑，上皮下存在其它的结缔组织和纤维细胞。

 

细胞中文名称：鸡气管黏膜上皮细胞永生化

细胞英文名称：Porcine lung fibroblast

形态特性：铺路石状细胞，不规则细胞

生长特性：贴壁培养
 

细胞特性

1)  组织来源于实验动物的正常气管黏膜组织。

2)  细胞鉴定：广谱角蛋白(PCK)免疫荧光染色为阳性。

3)  经鉴定细胞纯度高于90%。

4)  不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5)  细胞生长方式：铺路石状细胞，不规则细胞，贴壁培养。

1、 细胞传代：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；
2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 完全培养
液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min；
3）弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 完全培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代，最后放入 37℃， 5%CO2 细胞
培养箱中培养；

2、 细胞冻存：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；
2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终
止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min；
3）用适量的冻存液（FBS： DMSO=9 ： 1）重悬细胞，并放置于冻存管中；
4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜， 24h 后转入液氮中进行长期保存。使用程序
降温盒可直接放入-80℃。

3、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结
晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2）将冻存管中的细胞移至含 6ml 完全培养基的 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min；
3）弃上清，沉淀用 6ml 完全培养基重悬，接种 25cm2 培养瓶，于 37℃， 5%CO2 细胞培养箱中培养



鸡气管黏膜上皮细胞永生化收到后处理

细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液移入废液缸中，悬浮细胞需离心处理，加入6ml新鲜完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤说明书。