BeyoMag™ Protein A+G磁珠

碧云天研发生产的BeyoMag™ Protein A+G磁珠(BeyoMag™ Protein A+G Magnetic Beads)，也称Protein A+G免疫磁珠、Protein A+G免疫沉淀磁珠、SPA+G磁珠、蛋白A+G磁珠、蛋白A+G免疫磁珠或蛋白A+G免疫沉淀磁珠，是由高质量的重组Protein A、G与纳米级氨基磁珠共价偶联而成，可特异性地结合相应抗体，主要用于免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)、免疫共沉淀(Co-IP)或染色质免疫沉淀(Chromatin Immunoprecipitation, Ch-IP)，也可以用于血清、细胞培养上清液或腹水等样品中抗体的纯化等。

Protein A是一种发现于金黄色 葡萄球菌(Staphylococcus  aureus)的细胞壁表面蛋白，分子量为42kDa；Protein G是C型或G型链球菌(Streptococcal bacteria)表达的免疫球蛋白结合蛋白。Protein A和Protein G功能相似，能特异性地与哺乳动物免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig)结合，结合的部位通常为免疫球蛋白的Fc区，但有资料显示Protein A也会和人VH3家族的Fab区结合，而Protein G有时与Fab区也有一定结合。同时，两者对于不同的免疫球蛋白亚类的结合能力有所不同。适当重组改造的Protein A 、G与磁珠以一定的方式结合，可用于免疫沉淀或抗体的纯化。

Protein A+G磁珠适合于免疫沉淀所有Protein A磁珠和Protein G磁珠单独可以免疫沉淀的抗体，包括human IgG₁、IgG₂、IgG₃、IgG₄，mouse IgG₁、IgG_2a、IgG_2b、IgG₃，rat IgG₁、IgG_2a、IgG_2b、IgG_2c、rabbit、goat等多克隆抗体。下表是碧云天Protein A、Protein G、Protein A/G磁珠产品与人、小鼠、大鼠常见的免疫球蛋白亚类的结合能力及不同物种的总结合能力情况表。

Species	Ig	Protein A	Protein G	A+G
Human	IgG1	++++	++++	++++
	IgG2	++++	++++	++++
	IgG3	-	++++	++++
	IgG4	++++	++++	++++
	IgA	++	-	++
	IgD	++	-	++
	IgE	++	-	++
	IgM	++	-	++
Mouse	IgG1	+	++++	++++
	IgG2a	++++	++++	++++
	IgG2b	+++	+++	+++
	IgG3	++	+++	+++
	IgM	+/-	-	+/-
Rat	IgG1	-	+	+
	IgG2a	-	++++	++++
	IgG2b	-	++	++
	IgG2c	+	++	++
	IgM	+/-	-	+/-

Total Ig	Protein A	Protein G	A+G
Human	++++	++++	++++
Mouse	+++	+++	+++
Rat	+/-	++	++
Rabbit	++++	+++	++++
Goat	-	++	++
Chicken	-	+	+
Cow	++	++++	++++
Guinea Pig	++++	++	++++
Hamster	+	++	++
Horse	++	++++	++++
Pig	+++	+++	+++
Sheep	+/-	++	++

     ++++, Strong Binding
     ++~+++, Medium Binding
     +, Weak Binding
     +/-, Weak or No Binding
     -, No Binding


 

本产品中的重组Protein A和Protein G可与多数哺乳动物IgG的Fc端特异性结合，分子量均约为25kDa。该重组Protein A和Protein G通过改造，仅保留了与IgG Fc端结合相关的氨基酸序列，去除了结合位点以外可能导致非特异性结合的序列，从而可以有效减少非特异性结合。本产品的每个Protein A和Protein G分子分别可以结合5和3个IgG分子。

BeyoMag™ Protein A+G磁珠可以特异性地结合相应抗体，并可以借助磁力架等磁分离设备非常便捷地应用于抗体结合的目的蛋白或其蛋白复合物的免疫沉淀或抗体纯化等实验。本产品进行免疫沉淀的实验流程参考图1。

图1.碧云天的BeyoMag™ Protein A+G磁珠免疫沉淀流程图。

本产品抗体结合特异性强、抗体结合量高：传统的Protein A+G琼脂糖凝胶孔径大，容易产生非特异吸附，而本产品磁珠粒径小，不易产生非特异吸附。本产品每毫升磁珠悬浊液含约10mg磁珠，由Protein A磁珠和Protein G磁珠按1:1比例混合而成，含有不少于0.6mg重组Protein A、G，通常可结合不少于0.7mg人IgG，具体的最大结合量和抗体类型及目的蛋白等相关。每500微升样品，通常仅需使用10-20微升磁珠悬浊液，就可以高效地进行免疫沉淀实验。

本产品结合抗体或抗体复合物的速度快：本产品所使用的纳米级磁珠(~200nm)具有超大比表面积，便于磁珠与抗体或抗体复合物的快速有效结合。通常10分钟内即可完成抗体或其复合物的吸附的过程，30分钟内完成目的蛋白免疫沉淀操作。缩短操作时间可以有效避免在长时间操作过程中目的蛋白的降解或变性，充分保证目的蛋白的活性。由于采用磁性分离，每次进行IP和Co-IP相比于琼脂糖凝胶可以节省40%的时间。

本产品可选择多种洗脱方法：本产品根据抗体复合物中目的蛋白的结构、生物学功能及后续应用的要求等，可以使用多种洗脱方法，包括酸性溶液、SDS-PAGE上样缓冲液或竞争性多肽等洗脱液进行洗脱。本产品用于GFP-Flag融合蛋白的免疫沉淀效果参考图2。

图2. BeyoMag™ Protein A+G磁珠用于GFP-Flag融合蛋白的免疫沉淀效果图。293T (人胚肾细胞)转染GFP-Flag质粒36小时后，经Western及IP细胞裂解液(P0013)裂解。样品1为Input，即全细胞裂解液；样品2、3和4都为本Protein A+G磁珠免疫沉淀后的样品，其中样品2中使用的是正常的小鼠IgG (Normal Mouse IgG) (A7028)免疫沉淀后经SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(1X) (P0015A)洗脱后得到的样品，为阴性对照；样品3和4进行IP时使用的都是Flag抗体(AF519)，其中样品3使用SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(1X)洗脱，样品4使用3X Flag多肽(P9801)洗脱。使用SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(1X)洗脱后可以检测到Flag抗体的轻重链，而使用3X Flag多肽洗脱仅含有GFP-Flag，整个泳道仅检测到单一的目的条带。Western印迹成像由BeyoImager™ 600化学发光成像系统完成(EI600)。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

本产品使用便捷。本产品储存在特殊保护液中，不含甘油，可以通过磁性吸附实现快速高效的分离，无需离心操作。

本产品的主要指标如下表：

Characteristics	Description
Product content	10mg/ml magnetic beads in specific protective buffer
Beads size	~200nm
Magnetization	Superparamagnetic
Coupled protein	Recombinant Protein A and Protein G
M.W. of protein	~25kDa (Protein A and Protein G)
Antibody concentration	≥0.6mg Protein G per ml beads
Binding capacity	≥ 0.7mg human IgG per ml beads
Specificity	Antibodies from many different species, including mouse, human, rabbit, cow, goat and sheep
Elution method	Elution with acid, competing peptide or SDS‐PAGE loading buffer
Application	IP, Co-IP, Protein purification

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
P2108-1ml	BeyoMag™ Protein A+G磁珠	1ml
P2108-5ml	BeyoMag™ Protein A+G磁珠	5ml
－	说明书	1份

保存条件：

4℃保存，两年有效。长期不使用，可以-20℃保存，-20℃可以保存更长时间。

注意事项：

本产品经测试，反复冻融3次以上，不影响使用效果。

本产品需维持pH为6-8，避免高速离心、干燥或冻存；请勿长时间将磁珠置于磁场中，否则可能会引起磁珠聚团。

本产品使用前要适当充分重悬，即颠倒若干次使磁珠混合均匀，混匀操作须轻柔，不宜剧烈涡旋震荡等，避免蛋白变性等。

在免疫沉淀或纯化时，建议设置阳性和阴性对照组。

蛋白样品收集后宜尽快完成纯化工作，并应始终放置在4℃或冰浴，以减缓蛋白降解或变性。为有效抑制蛋白降解，可以在蛋白样品中添加适量的蛋白酶抑制剂混合物，例如碧云天的P1005/P1006蛋白酶抑制剂混合物(通用型)、P1048/P1049 蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(通用型, 质谱兼容, 50X)、P1010/P1011 蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 100X)、P1050/P1051 蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 50X)等。

如果使用真空泵等仪器吸取上清液，须注意真空泵的吸液强度，以免吸力过大而吸取到聚集的磁珠。

酸性溶液洗脱时磁珠可能会发生聚集，属于正常现象，不影响磁珠的正常使用。0.1%的非离子型去垢剂(如Triton X-100、Tween-20或NP-40)可有效防止磁珠聚集，并且不会影响磁珠的抗体结合效率。

高浓度的DTT、巯基乙醇、盐酸胍等对本产品与标签蛋白的结合可能有一定影响，但Western及IP细胞裂解液(P0013)、RIPA裂解液(P0013B/C/D)或NP-40裂解液(P0013F)等都完全适用。碧云天生产的不同裂解液的主要特点和差异，以及如何选择裂解液可参考我们的相关网页：http://www.beyotime.com/support/lysis-buffer.htm。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。