肺成纤维细胞

肺成纤维细胞
 

成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分。在肺组织中生理条件下，成纤维细胞的主要功能包括:构造和维持肺脏的正常形态，合成和释放细胞外基质，为肺组织和细胞的高效交换气体提供物质基础，构成肺组织的主要支架，维持肺上皮和内皮细胞正常生理作用，以及组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。病理条件下，成纤维细胞病理性增殖转型及细胞外基质进行性异常积聚并取代正常的肺组织结构，从而造成肺部的纤维化。
 

细胞英文名称：肺成纤维细胞

细胞中文名称：Pulmonary Fibroblasts Cells

形态特性：成纤维样细胞

生长特性：贴壁培养
 

细胞特性
1) 细胞来源于手术切除的正常肺组织。
2) 细胞鉴定：纤维连接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）免疫荧光染
色为阳性。
3) 经鉴定细胞纯度高于 90%。
4) 不含有  HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
5) 细胞生长方式：成纤维样细胞，贴壁培养。

1、 细胞传代：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；
2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 完全培养
液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min；
3）弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 完全培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代，最后放入 37℃， 5%CO2 细胞
培养箱中培养；

2、 细胞冻存：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；
2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终
止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min；
3）用适量的冻存液（FBS： DMSO=9 ： 1）重悬细胞，并放置于冻存管中；
4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜， 24h 后转入液氮中进行长期保存。使用程序
降温盒可直接放入-80℃。

3、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结
晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2）将冻存管中的细胞移至含 6ml 完全培养基的 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min；
3）弃上清，沉淀用 6ml 完全培养基重悬，接种 25cm2 培养瓶，于 37℃， 5%CO2 细胞培养箱中培养



肺成纤维细胞收到后处理

细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液移入废液缸中，悬浮细胞需离心处理，加入6ml新鲜完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤说明书。