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- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
80
- 英文名：
天冬酰胺合成酶AS活性测定试剂盒
- 保质期：
12个月
- 供应商：
上海酶联生物科技有限公司
- 保存条件：
避光 , 低温保存
- 规格：
100管/96样
微量法
注 意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
天冬酰胺合成酶是广泛存在于生物体内的一类氨基转移酶，催化谷氨酞胺的氨基向天冬氨酸转移。当植物处于氨毒时天冬酞胺的形成是一种解毒反应。
测定原理：
AS催化L-天冬酰胺水解成L-天冬氨酸和氨，利用奈氏试剂检测氨增加的速率，即可计算其酶活性。
需自备仪器和用品：
台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵、冰和双蒸水。
试剂组成和配制：
试剂一×2瓶，60 mL，4 ℃保存；
试剂二×1瓶，40 mL，4 ℃保存；
试剂三×1瓶，60 mL，常温保存；
试剂四×1瓶，5 mL，常温保存；
试剂五×1瓶，3 mL，常温保存；
试剂六×1瓶，3 mL，常温避光保存。
粗酶液提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至420nm，蒸馏水调零。
2、样品测定（在EP管中加入下列试剂）：
| 试剂名称（uL） | 测定管 | 对照管 |
| 样本 | 25 | |
| 蒸馏水 | 25 | |
| 试剂一 | 100 | 100 |
| 试剂二 | 400 | 400 |
| 试剂三 | 525 | 525 |
| 上清液 | 130 | 130 |
| 试剂四 | 30 | 30 |
| 试剂五 | 20 | 20 |
| 试剂六 | 20 | 20 |
注意：试剂六如出现沉淀，静置后取上清使用。
天冬酰胺合成酶AS活性测定试剂盒
酶活性计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.662x -0.0434；x为标准品浓度（μg/mL），y为吸光值A。
1、血清（浆）AS活性
单位定义：每mL血清（浆）每小时产生1μg 氨定义为一个酶活力单位。
AS（μg/h/mL）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V反总÷V样÷T=31.722×(ΔA+0.0434)
2、组织、细菌或细胞中AS活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每小时产生1μg 氨定义为一个酶活力单位。
AS活力（μg/h/mg prot）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V反总÷(V样×Cpr)÷T =31.722×(ΔA+0.0434) ÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每小时产生1μg氨定义为一个酶活力单位。
AS活力（μg/h/g 鲜重）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V反总÷(W× V样÷V样总)÷T =31.722×(ΔA +0.0434) ÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每小时产生1μg 氨定义为一个酶活力单位。
AS活力（μg/h/104 cell）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V反总÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.0634×(ΔA+0.0434)
T：反应时间，1h； V反总：反应体系总体积：0.525mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.025mL；V样总：提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量， g；500：细菌或细胞总数，500万
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.3046x -0.0097；x为标准品浓度（μg/mL），y为吸光值A。
1、血清（浆）AS活力的计算:
单位的定义：每mL血清（浆）每小时产生1μg 氨定义为一个酶活力单位。
AS活力（μg/h/mL）＝(ΔA +0.0097) ÷0.3046×V反总÷V样÷T=68.94×(ΔA +0.0097)
2、组织、细菌或细胞中AS活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每小时产生1μg 氨定义为一个酶活力单位。
AS活力（μg/h/mg prot）＝(ΔA +0.0097) ÷0.3046×V反总÷(V样×Cpr)÷T =68.94×(ΔA +0.0097) ÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每小时产生1μg氨定义为一个酶活力单位。
AS活力（μg/h/g 鲜重）＝(ΔA +0.0097) ÷0.3046×V反总÷(W× V样÷V样总)÷T =68.94×(ΔA +0.0097）÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每小时产生1μg 氨定义为一个酶活力单位。
AS活力（μg/h/104 cell）＝(ΔA+0.0097) ÷0.3046×V反总÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.1379×(ΔA +0.0097)
T：反应时间，1h； V反总：反应体系总体积：0.525mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.025mL；V样总：提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量， g；500：细菌或细胞总数，500万。
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文献和实验的组氨酸和半胱氨酸残基的 B 因子分布与所有组氨酸和半胱氨酸残基的无太大差别。这可能是由于这两种氨基酸出现催化残基的比例太高所导致的。保守性催化残基具有更高的保守性，随着与催化残基距离的增加，残基的保守性也稳定下降。这表明与活性位点附近的其他残基相比，催化残基的强选择压力，这对于底物识别是重要的。有效的催化取决于关键原子的精确定位，这通常只能通过使用特定的氨基酸残基（例如天冬氨酸代替谷氨酸）来实现。另外，空间结构上接近催化残基的残基比氨基酸残基序列中相近残基更保守。需要注意的是，酶活性位点不一
酸，天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸及谷氨酰胺由丙酮酸、草酰乙酸和α－酮戊二酸合，三种α-酮酸：丙酮酸、草酰乙酸和α-酮戊二酸分别为丙氨酸，天冬氨酸和谷氨酸的前体，经一步转氨反应可生成相应氨基酸(图7－22、反应1-3)。天冬酰胺和谷氨酰胺分别由天冬氨酸和谷胺酸加氨反应生成(图7-22反应4，5)。谷氨酰胺合成酶(glutamine cynthetase)催化谷氨酰胺合成，NH3为氨基供体、反应中消耗ATP生成ADP和Pi。而天冬酰胺由天冬酰胺合成酶(asparagine synthetase)催化
的a型，许多激素对代谢的调节就是通过这种方式进行的。 这种调节方式能比较迅速地对外界环境因素的变化作出反应，其中第一种经过蛋白水解酶作用活化的调节是不可逆的。第二种则可以通过蛋白磷酸酶水解除去磷酸基团后使活化的酶恢复原来的低活性或无活性状态。 通过酶分子与一些代谢物的结合进行调节 酶分子与一些代谢物可逆结合后，酶的催化活性可以显著提高或下降，从而直接影响代谢速率。通常所谓产物反馈调节就属于这种类型。例如，大肠杆菌合成苏氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸和异亮氨酸都以天冬氨酸为原料
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