6-羧基吡啶-2-甲醇,6-(Hydroxymethyl)p

甲醇酵母表达载体及其元件

，易扩增，具有真光霉素抗性。1、启动子最常用的启动子是AOX1启动子(AOXl，promoter，PA0X)，它的甲醇诱导性很强，因而它控制下的外源基因能得到较高的表达。A0X1基因是从用RNA构建的cDNA文库中分离的，RNA来自克隆筛选能在甲醇培养基上生长的P．Pasotris细胞。P．Pasotris基因组包含2个基因：AOX1和AOX2，编码乙醇氧化酶。在序列上这2种AOX蛋白同源性≥97％，并有相似特殊活性，但A0X1表达水平明显高于AOX2，即启动能力AOX1大大强于AOX2。细胞

甲醇酵母基因表达系统

　1 甲醇酵母表达系统的特点   　　1.1 宿主   　　七十年代巴斯德毕赤酵母曾被用于生产单细胞蛋白（SCP），有很好的发酵基础，菌体密度可达100g/L干重。其生长培养液的组分包括无机盐、微量元素、生物素、氮源和碳源，廉价而无毒。它能在以甲醇为唯一碳源的培养基中快速生长，其中醇氧化酶AOX――甲醇代谢途径的关键酶可达细胞可溶性蛋白的30％[1]。而在葡萄糖、甘油或乙醇作为碳源的培养细胞中则检测不到AOX。AOX的合成是在转录水平调控的。其基因启动

甲醇酵母表达常用溶液及缓冲液的配制

除菌。10*D：（20%Dextrose 葡萄糖）保存期为1年。200g葡萄糖溶于1000ml水中，灭菌15min或过滤除菌。10*M：（5%Methanol 甲醇） 保存期为2个月。将5ml的甲醇与95ml水混匀，过滤除菌。10*GY：（10%Glycerol 甘油） 保存期为1年以上。将100ml甘油和900ml水混匀后，高压灭菌或过滤除菌。100*AA：（0.5% of each Amino Acid，各种氨基酸） 4℃保存 保存期为1年。分别将500mg的L-谷氨酸、L-蛋氨酸、L-