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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
优利科(上海)生命科学有限公司
- 库存:
100
- 样本:
血清、血浆、组织液等液体样本
- 标记物:
hrp辣根过氧化物酶
- 适应物种:
人
- 应用:
科研
- 检测方法:
酶联免疫法
- 检测范围:
6pmol/L -250 pmol/L
- 规格:
96T/48T
96T
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:
6pmol/L -250 pmol/L
使用目的:
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中高敏甲状腺素(u-T4)含量。
相关图片(一):

实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人高敏甲状腺素(u-T4)水平。用纯化的人高敏甲状腺素(u-T4)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入高敏甲状腺素(u-T4),再与HRP标记的高敏甲状腺素(u-T4)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的高敏甲状腺素(u-T4)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人高敏甲状腺素(u-T4)浓度。
试剂盒组成
| 1 | 30倍浓缩洗涤液 | 20ml×1瓶 | 7 | 终止液 | 6ml×1瓶 |
| 2 | 酶标试剂 | 6ml×1瓶 | 8 | 标准品(400 pmol/L) | 0.5ml×1瓶 |
| 3 | 酶标包被板 | 12孔×8条 | 9 | 标准品稀释液 | 1.5ml×1瓶 |
| 4 | 样品稀释液 | 6ml×1瓶 | 10 | 说明书 | 1份 |
| 5 | 显色剂A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2张 |
| 6 | 显色剂B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1个 |
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
相关图片(二):

操作步骤
- 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
| 200 pmol/L | 5号标准品 | 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 100 pmol/L | 4号标准品 | 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 50 pmol/L | 3号标准品 | 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 25 pmol/L | 2号标准品 | 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 12.5pmol/L | 1号标准品 | 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 |
- 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
- 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
- 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
- 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
- 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
- 温育:操作同3。
- 洗涤:操作同5。
- 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.
- 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
- 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
相关图片(三):

注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6个
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