(3-甲基苄基)膦.酸二乙酯,Diethyl 3-methy

细胞上清液提取常见问题解析

培养 24 - 48 h，细胞汇合度达到 80% - 95% 左右时收取上清，该上清液即可用于提取外泌体。 使用外泌体专用无血清培养基： 待细胞汇合度~50%时，移去原有完全培养基，添加新培养基进行培养，新培养基由 50% 外泌体专用无血清培养基 + 50% 完全培养基组成； 待细胞生长汇合度约为70-80%时，移去培养基； 使用1×PBS溶液将细胞润洗2-3次； 加入外泌体专用无血清培养基继续培养24 - 48 h，待细胞汇合度到 80% - 95% 时收取细胞培养上清液，该上清液即可用于外泌

全新发布：外泌体样本收集指南

（或无外泌体血清培养基）时的细胞密度与收培养上清时 的细胞密度，  一定要有显著增长，例如从60~70% 长到 90~95%。如细胞无显著增殖生长则无 需收样检测，基本没有多少外泌体分泌。也应避免细胞长得过满导致细胞凋亡，细胞凋亡可能降解外泌体； 2） 及时离心处理。收集细胞上清后第一时间离心去除细胞及细胞碎片，离心后的细胞上清再放入 -80℃ 冰箱保存，避免外泌体因细胞及细胞碎片存在而导致外泌体降解； 3) 无血清替代培养基并非指的是 DMEM、 1640 此类基础培养基，而是可以正常维持细胞

肝脏细胞RNA的提取

的哺乳动物细胞约含有10-5μgRNA ，其中80%～85%为rRNA（主要是28S、18 S和5.8 S、5S四种类型）；10%～15%为tRNA和核内小分子RNA。这些高峰度的RNA的大小和序列确定，可通过凝胶电泳、密度梯度离心、阴离子交换层析和高压液相层析（HPLC）分离。相反，占RNA总量1%～5%的为mRNA 。mRNA 虽然大小和核苷酸序列各不相同，从数百至数千碱基不等，但大多数真核细胞mRNA在其3'端均有一寡聚腺苷酸(polyA)组成的尾，其长度一般足以吸附于寡聚脱氧胸苷酸―纤维