(2-氨基-5-甲.氧.基.苯基)甲醇,(2-Amino-5

甲醇酵母系统表达的影响因素

表达系统的局限性还在于分泌产物的不均一性，包括聚合体的存在、信号肽加工不完全以及内部降解等现象。所有这些都提醒我们在Pp中表达外源蛋白时，应周密考虑影响其表达的各个因素。甲醇酵母可以在以甲醇为唯一碳源和能源的培养基中生长。这是因为其细胞中含有甲醇代谢途径的必需酶，如醇氧化酶(AOX)、二羟丙酮合成酶和过氧化氢酶等，其中AOX是甲醇酵母利用途径中的第1个酶，它催化甲醇被氧化为甲醛和过氧化氢。过氧化氢进一步由过氧化 氢酶分解成水和氧。甲醛在胞浆内被甲醛脱氢酶(FMD)和甲酸脱氢酶(FMDH)氧化成二氧

甲醇酵母表达常用溶液及缓冲液的配制

除菌。10*D：（20%Dextrose 葡萄糖）保存期为1年。200g葡萄糖溶于1000ml水中，灭菌15min或过滤除菌。10*M：（5%Methanol 甲醇） 保存期为2个月。将5ml的甲醇与95ml水混匀，过滤除菌。10*GY：（10%Glycerol 甘油） 保存期为1年以上。将100ml甘油和900ml水混匀后，高压灭菌或过滤除菌。100*AA：（0.5% of each Amino Acid，各种氨基酸） 4℃保存 保存期为1年。分别将500mg的L-谷氨酸、L-蛋氨酸、L-

甲醇酵母基因表达系统

　1 甲醇酵母表达系统的特点   　　1.1 宿主   　　七十年代巴斯德毕赤酵母曾被用于生产单细胞蛋白（SCP），有很好的发酵基础，菌体密度可达100g/L干重。其生长培养液的组分包括无机盐、微量元素、生物素、氮源和碳源，廉价而无毒。它能在以甲醇为唯一碳源的培养基中快速生长，其中醇氧化酶AOX――甲醇代谢途径的关键酶可达细胞可溶性蛋白的30％[1]。而在葡萄糖、甘油或乙醇作为碳源的培养细胞中则检测不到AOX。AOX的合成是在转录水平调控的。其基因启动