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文献和实验RNA酶保护试验((RNase Protection Assay,RPA)方法
与纯化 在0.5ml 离心管中加入下列试剂: RNasin (40U/μl) 0.5μl GACU POOL GAC (含GTP、CTP、ATP各2.75 mM,UTP 61μM) 2μl [α-32P]UTP(10μCi/μl) 2.5μl DTT (二硫苏糖醇,0.1M) 1μl 5×转录 buffer 2μl 模板(50ng/μl) 1μl T7 RNA 聚合酶 (15U) 1μl 混合后,短暂
时可考虑100-400bp长。最好采用巢式PCR,即先扩增出一较长的片段,再以该片段为模板扩增出较短的片段,以保证探针的特异性。 (2)PCR:先用上游引物和下游引物Ⅰ进行PCR,再以PCR 产物为模板,用上游引物和下游引物Ⅱ-T7进行二次PCR。 (3)探针合成标记与纯化 在0.5ml 离心管中加入下列试剂: RNasin (40 U/μl) 0.5 μl GACU POOL GAC (含GTP、CTP、ATP各2.75 mM,UTP 61 μM) 2 μl [α-32
)。 (3)探针合成标记与纯化 在0.5ml 离心管中加入下列试剂: RNasin (40U/μl) 0.5μl GACU POOL GAC (含GTP、CTP、ATP各2.75 mM,UTP 61μM) 2μl [α-32P]UTP(10μCi/μl) 2.5μl DTT (二硫苏糖醇,0.1M) 1μl 5×转录 buffer 2μl
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