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N
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无锡云萃生物
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78628-80-5
- 规格：
5mg/50mg/100mg/500mg
| 规格： | 5mg | 产品价格： | ￥100.0 |
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云萃
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文献和实验2.5×1010个细胞/ml）。分装，-80℃或液氮保存待用。 2、病毒骨架质粒转化大肠杆菌，扩增，纯化。 3、将1-5ul （约1ug） 线性化的穿梭质粒及1ul（约100ng/ul）病毒骨架质粒（如pAdEasy-1）加入至含约40ul BJ5183电转感受态的EP管中混匀，冰上冷却。 4、将混合物加入电转杯，电击（1250-1500V/mm,5ms）。 5、电击结束取出样品，加入1ml SOC或LB培养液，37℃低速振荡40min。 6、取适当体积的电击转化细胞液涂于数个卡那霉素抗性
将菌液转移至预冷的离心管中，4℃下以2500r/min离心15 min，弃培养液，回收细胞。 ² 以10ml预冷的10%甘油洗涤沉淀，低温离心，共两次。 ² 加约1ml（适量）预冷的10%甘油重悬沉淀，稀释悬液100倍，测量OD600 ， 至稀释浓度为2-3×1010 个细胞/ ml (1.0 OD600 约2.5×1010 个细胞/ml)。分装，-80℃或液氮保存待用。 2 病毒骨架质粒转化大肠杆菌，扩增，纯化。 3 将1-5µl
在园子里经常看到询问冻存、复苏细胞的方法和注意事项。故介绍一些致命的 “败笔”，和解决方法。 希望对大家有帮助。 （ 以 Raji 为例） 一、细胞冻存： 1. 错误的时机： 细胞状态不好（长的太过了，培养液已经很黄；细胞可疑污染；细胞已 经开始凋亡或崩解；连续培养超过二个月，细胞性状已有改变改变）。 解决： 最佳时机：细胞增殖旺盛，情况稳定，试验效果良好，复苏后两周内。 2. 细胞太少： 冻存时细胞浓度低于 1-5×1000,000/ml。（复苏很难成功）。 解决： 离心后调整细胞
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