葡萄糖-6-磷酸Glucose -6-phosphate，6

葡萄糖-6-磷酸Glucose -6-phosphate，6PG含量测定试剂盒
分光光度法 
注    意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：
 6PG (Glucose-6-phosphate，葡萄糖-6-磷酸，又称6-磷酸葡萄糖)，是糖酵解和磷酸戊糖途径的中间产物，广泛存在于动植物体和微生物中。在糖酵解的步反应中，葡萄糖被己糖激酶催化生成葡萄糖-6-磷酸，然后通过磷酸葡萄糖异构酶的催化形成果糖-6-磷酸，以继续糖酵解的其它步骤；而在戊糖磷酸途径中，葡萄糖-6-磷酸是其个底物，该过程也是生成NADPH的主要途径。此外，葡萄糖-6-磷酸也能转化形成糖原或淀粉而被储存起来。

测定原理：
6-磷酸葡萄糖脱氢酶可催化6PG和NADP+生成6磷酸葡萄糖酸和NADPH，NADPH在1-mPMS的作用下使WST-8显橙，在450 nm下测定吸光值。

需自备的仪器和用品：
分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水。



试剂的组成和配制：
提取液：液体60 mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体30mL×1瓶， 4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；
试剂三：液体3mL×1瓶， 4℃避光保存。

6PG提取： 
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）， 8000g，25℃离心10min，取上清待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆，8000g，25℃离心10min，取上清待测。
3、血清（浆）等液体样品：直接测定。

测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至450nm，蒸馏水调零。
2、试剂二的配制：临用前加入8mL水充分溶解待用，用不完的试剂分装后-20℃保存；
3、工作液的配制：临用前按照样本数量，按以下比例配制工作液
试剂名称（μL）    测定工作液    对照工作液
试剂一    500    500
试剂二    250    
水        250
试剂三    50    50
4、样本测定
按下表在比色皿中加入如下试剂
试剂名称（μL）    测定管    对照管
样本    250    250
测定工作液    750    
对照工作液         750
37℃避光孵育30min，450nm下测定吸光值A测定与A对照，△A=A测定-A对照。每个测定管需设一个对照管。

葡萄糖-6-磷酸Glucose -6-phosphate，6PG含量测定试剂盒
6PG含量计算：
1、标准条件下测定回归方程为y = 7.7178x - 0.0016，R2 = 0.997； x为6PG含量（μmol/mL），y为吸光值。
2、按照血清（浆）体积计算
6PG含量（nmol/mL）= [(△A+0.0016)÷7.7178×V1]÷×V1×1000=129.6×(△A+0.0016)
3、按照蛋白浓度计算
6PG含量（nmol/mg prot）= [(△A+0.0016)÷7.7178×V1]÷(V1×Cpr)×1000=129.6×(△A+0.0016) ÷Cpr
4、按照样品质量计算
6PG含量（nmol/g鲜重）= [(△A+0.0016)÷7.7178×V1]÷(W ×V1÷V2）×1000=129.6×(△A+0.0016) ÷W
3、按照细菌或细胞密度计算
6PG含量（nmol/104 cell）= [(△A+0.0016)÷7.7178×V1]÷（500×V1÷V2）×1000=0.259×(△A+0.0016)
V1：加入反应体系中样本体积，0.25mL；V2：加入提取液体积，1 mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万；1000，μmol到nmol的换算系数。