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- 智立中特
- 武汉
- 202211817164682471
- 2025年08月07日
企业认证
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
零下80℃
- 保质期：
一年
- 英文名：
pENTR223-EP400(有缺失)
- 库存：
1
- 供应商：
智立中特（武汉）生物科技有限公司
- 规格：
甘油
启动子:
复制子:pUC
感受态:DH5a
培养温度:37度
质粒宿主：大肠杆菌
质粒用途：基因模板
片段类型：cDNA
片段物种：人
原核抗性：Spe
、质粒菌株产品操作说明书
扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必先转化提质粒后使用）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μlddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另外不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，保质期90天，请务必先转化提质粒后使用）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
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智立中特（武汉）生物科技有限公司是一家集生物研发，生产，销售，售后为一体的高新技术产业公司。拥有载体质粒，载体，国内外微生物菌种资源，感受态细胞，培养基，细胞株等广泛的生产销售线。
公司具备超净工作台、生物安全柜、-86℃超低温冰箱、高压灭菌锅，高速大型离心机，超低温离心机，生化培养箱等专业仪器设备，同时拥有多名长期从事分子生物研究的工作人员，可以快速有效的帮助全球生物科研工作者分享和获取相关产品。公司成立至今服务大量包括广大生命科研客户，包括北大清华中国农业大学等高校，中日友好医院，解放军总医院等医院，中科院，军科院，农科院等科研机构和一些部队单位。
通过产品研发的不断创新，服务质量不断提高，赢得了广大生命科研用户的信赖。并为工业农业等领域提高微生物产品和技术解决方案从而成为可信赖合作伙伴。
质粒载体产品：
提供各种类型载体宿主，基因种属类型，抗性，设计并构建质粒：大肠杆菌表达载体；哺乳动物表达载体；酵母表达载体；昆虫表达载体；植物表达载体；广;腺病毒载体...常用有pACYC184；pACYCDuet-1；pASK-IBA5plus+FUS(人基因）；pAX01；pBABE-Puro；pBAD24
pBI121；pBIFC-bFosVC155；pBIFC-VC15；pCDFDuet-1；pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro；pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-puro；pBIFC-VN155(I152L)addgene27097；pCDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro；pCAGGS；pBiFC-VN173(Plasmid#22010)；pBlueScriptSK(+)；pBlueScriptIISK(+)；pBV220；pCas；pCas9
pBR322；pBT3-STE；pBudCE4.1以及结合转移质粒RP4；pGL4.25[luc2CP/minP];pGR106;pIRES2-AcGFP1-Nuc;psfGFP;pHEN1;pNL1.1[Nluc];pBBR1-GFP；pBMTB-5;pBMTB-4;pBMTB-3;pBMTB-2;pCAMBIA0305.1;pCX-DR;;pGreenII0800-miRNA;pK7GWIWG2(I);pRARE;pDG1663
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文献和实验xin1027 如何将一个基因中的某个片段进行缺失呀？不知道用什么方法，具体怎么做？盼高手指点！！ woxingwosu 你是希望什么缺失呀？直接从基因组上敲掉？还是在质粒上呀？能不能说清楚呀。。。 xin1027 很多术语我不太清楚，就用个比方吧，假设说一段序列ATTGATCGAGGT，是PCR产物，需要将其中的ATCG除掉，只剩ATTGAGGT。这个应该怎么做。
keimon 要对MUT基因缺失的病进行检查，检测对象是个携带者，怀疑是大片段DNA缺失，求大片段外显子缺失的检查方法？ :D woxingwosu 呵呵，虽然不熟悉，我也来说说看法。 是否可以通过PCR基因组来判断呢？设计一对引物，其中一个引物要在这个大片段上面，然后从对象提取基因组，做PCR，再与正常的基因组比较得到差异？ 或者是通过提RNA,RT-PCR,最后在用这一对引物去检测与正常的差别
相信很多朋友都经历过临床数据缺失，看着一个个空白的格子束手无策。 其实在临床试验中，病例脱落导致数据缺失是十分常见且难以避免的。在尽量避免不必要的数据缺失的同时，还应掌握了相应的缺失数据处理方法。 一、为什么会产生「缺失数据」？ 临床试验中的缺失数据一般是由于受试对象在试验中因依从性差、不良事件或疗效不佳等原因提前退出试验造成的； 也可能是因为采集标本或测量过程中因样本量不足或灵敏度不够所造成的疗效指标缺失； 也可能是在数据记录或整理过程中造成的数据丢失等。 二、缺失
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