- ￥862
- mlBio/酶联生物
- mlE3233
- 国内
- 2025年07月24日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
22
- 英文名：
氨基比林-N-去甲基化酶AND测试盒
- 保质期：
12个月
- 供应商：
上海酶联生物科技有限公司
- 保存条件：
避光 , 低温保存
- 规格：
50管/24样
氨基比林-N-脱甲基酶AND试剂盒
分光光度法
注 意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：细胞色素P450酶是一组在外源物质代谢中，尤其是药物和毒物，具有重要作用的酶系。AND作为P450酶系的重要一员，相当于CYP3A4亚型，与药物的去甲基化反应密切相关。
测定原理：
AND催化氨基比林释放甲醛，通过Nash比色法测定甲醛含量，即可计算出AND活性。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、普通离心机，超速离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、蒸馏水、无水乙醇和冰。
试剂组成和配制：
试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加50mL蒸馏水充分溶解。
试剂二：液体×1瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1瓶（棕色瓶），4℃避光保存。临用前加入2.6 mL无水乙醇，充分溶解。
试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入2.6 mL蒸馏水，充分溶解。
试剂五：粉剂×1瓶，室温保存。临用前加蒸馏水10mL充分溶解。
试剂六：液体×1瓶，室温保存。
试剂七：液体×1瓶，4℃保存。
标准液：液体×1瓶，-20℃保存。临用前取1.5 mL EP 管，加入10μl标准液，加990μl蒸馏水，混匀即为0.05 mmol/L标准甲醛溶ye，4℃保存。
粗酶液提取：
1、除去细胞核，线粒体等大分子物质：称约0.5g组织，加入1 mL试剂一，冰上充分研磨，10 000g 4℃离心30min，取上清液转入超速离心管。
2、粗制微粒体：4℃，100 000g，离心60min，弃上清液。
3、除血红蛋白等杂质：向步骤2的沉淀中加1mL试剂一，盖紧后充分震荡溶解，100 000g离心30min，弃上清液。
4、终微粒体：向步骤3的沉淀中加试剂二0.5 mL，盖紧后充分震荡溶解，即粗酶液，待测。该待测液需当天使用。
AND活性测定操作：
1. 分光光度计预热30 min，调节波长到412 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二置于37℃水浴中预热30min。
3. 对照管：取1支EP管，加入50μL粗酶液，850μL试剂二，50μL试剂三，50μL蒸馏水，混匀后置于37℃水浴保温30min；立即加入175μL试剂五，混匀后置于冰浴中5min；取出后加入175μL试剂六，混匀后室温静置5min；室温8000rpm离心5min；取新的EP管，加入500μL上清液，500μL试剂七，混匀后60℃水浴10min，然后取出，用冷水冷却5min，于412nm测定光吸收，记为A对照管。
4. 测定管：取1支EP管，加入50μL粗酶液，850μL试剂二，50μL试剂三，50μL试剂四，混匀后置于37℃水浴保温30min；立即加入175μL试剂五，混匀后置于冰浴中5min；取出后加入175μL试剂六，混匀后室温静置5min；室温8000rpm离心5min；取1支新EP管，加入500μL上清液，500μL试剂七，混匀后60℃水浴10min，然后取出，用冷水冷却5min，于412nm测定光吸收，记为A测定管。
5. 标准管：取1支EP管，加入500μL标准品，500μL试剂七，混匀后60℃水浴10min，然后取出，用冷水冷却5min，于412nm测定光吸收，记为A标准管。
注意：空白管只需要做一次。
氨基比林-N-脱甲基酶AND试剂盒
AND活性计算：
(1).按照蛋白浓度计算:
活性单位定义：37℃中每分钟每毫克蛋白催化产生1nmol甲醛为1个酶活单位。
AND活性(nmol/min/mg prot)= C标准品×V标准品×（A测定管－A对照管）÷A标准管×稀释倍数÷（Cpr×V样）÷T
= 45×（A测定管－A空白管）÷A标准管÷Cpr
(2).按照样本质量计算:
活性单位定义：37℃中每分钟每克样品催化产生1nmol甲醛为1个酶活单位。
AND活性(nmol/min/g 鲜重)= C标准品×V标准品×（A测定管－A对照管）÷A标准管×稀释倍数÷(W×V样)÷T
= 45×（A测定管－A对照管）÷A标准管÷W
C标准品：0.05 mmol/L=50μmol/L；V标准品：500μL=0.0005 L；稀释倍数：V反总÷V上清液=（50+850 +50+50+175+175）÷500=2.7；Cpr：粗酶液蛋白质浓度mg/mL，需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒；V样：加入粗酶液体积，50μL=0.05mL；W：样本质量，g ；T：反应时间，30min。
注意事项：
1、粗酶液需在当日完成测定，如需保存，则向粗酶液提取步骤3的沉淀中加0.5ml 20%的甘油，分装后，-80℃保存；
2、试剂三和试剂四需临用前配制，如当天没有用完，4℃避光保存，可用1周；
3、粗酶液可直接用于蛋白浓度测定，建议用BCA法测蛋白含量。
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文献和实验复制相关，组蛋白的去乙酰化和基因的失活相关。组蛋白乙酰化是一个动态过程，乙酰化和去乙酰化处于动态平衡状态。 乙酰化转移酶(histoneacetyltransferases，HAT)主要是在组蛋白 H3、H4 的 N 端尾上的赖氨酸加上乙酰基，去乙酰化酶(histonedeacetylase，HDAC)则相反，不同位置的修饰均需要特定的酶来完成。乙酰化酶家族可作为辅激活因子调控转录，调节细胞周期，参与 DNA 损伤修复，还可作为 DNA 结合蛋白。去乙酰化酶家族则和染色体易位、转录调控、基因
甲醛（去甲基作用的副产物）的形成。因此，易受洗涤剂、 巯基和一系列离子的干扰。与甲基化检测试剂盒类似，这些检测试剂盒对任何去甲基化酶都没有特异性，只能用纯化的蛋白进行检测。 组蛋白去甲基化酶检测试剂盒通过直接测定去甲基化产物的形成来规避这些问题，可确保： 组蛋白去甲基化酶检测试剂盒通过直接测定去甲基化产物的形成来规避这些问题，可确保： 灵敏度比基于甲醛的检测试剂盒更高（20 - 1,000 倍） 无硫醇、洗涤剂或离子干扰的更准确的数据 与核提取物或纯化蛋白的相容性（得益
性，当与羧酸结合时，可中和氨基酸负电荷。甲基化是由甲基转移酶介导的，S-腺苷甲硫氨酸 (SAM) 是主要的甲基供体。涉及甲硫氨酸循环。甲基化如此频繁，以至于 SAM 被认为是 ATP 之后酶促反应中最常用的底物。此外，尽管 N-甲基化不可逆，但 O-甲基化可能可逆。甲基化是众所周知的表观遗传调控机制，因为组蛋白甲基化和去甲基化会影响 DNA 的转录可用性。氨基酸残基可以偶联到单个甲基或多个甲基上，以增加修饰的效果。下图提供了与核小体核心颗粒相关的 PMT 的图解。图示：与组蛋白颗粒相关的翻译后修饰。核小体
