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无锡云萃生物
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187870-78-6
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| 规格: | 5mg | 产品价格: | ¥100.0 |
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云萃
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文献和实验内皮细胞培养至90~100% ↓ PBS洗细胞3遍(室温) ↓ 预热的蛋氨酸和无血清的培养基(MEM)LL nL 50 μM(分子量,383.5,50 mM,25 mg 溶于二甲基硫氧化物DMSO中1304 μl) 在37℃下孵育2小时。 ↓ 等同于(同步)MEM加1.5%BSA+10 μM LLnL50 μM 在37℃下孵育10分钟。 ↓ 置于冰上,预冷PBS洗细胞3次 ↓ 37℃温育2分钟 ↓ 放射性标记:细胞在代谢中以100 μCi
可以互相代替?可以替换,调pH不久没什么区别了吗;两者的功能团相同,pH不同,前者钠盐便于保存罢了 3、有关包涵体的溶解问题 强的变性剂如尿素(6-8M)、盐酸胍(GdnHCl 6M),是通过离子间的相互作用,打断包涵体蛋白质分子内和分子间的各种化学键,使多肽伸展,一般来讲,盐酸胍优于尿素,因为盐酸胍是较尿素强的变性剂,它能使尿素不能溶解的包涵体溶解,而且尿素分解的异氰酸盐能导致多肽链的自由氨基甲酰化,特别是在碱性pH值下长期保温时。SDS、正十六烷基三甲基铵氯化物、Sarkosyl等是去垢
分解的异氰酸盐能导致多肽链的自由氨基甲酰化,特别是在碱性pH值下长期保温时。SDS、正十六烷基三甲基铵氯化物、Sarkosyl等是去垢剂,可以破坏蛋白内的疏水键,也可溶解一些包涵体蛋白质。另外,对于含有半胱氨酸的蛋白质,分离的包涵体中通常含有一些链间形成的二硫键和链内的非活性二硫键。还需加入还原剂,如巯基乙醇、二硫基苏糖醇(DTT)、二硫赤藓糖醇、半胱氨酸。对于目标蛋白没有二硫键某些包涵体的增溶,有时还原剂的使用也是必要的,可能由于含二硫键的杂蛋白影响了包涵体的溶解。 4、8M尿素溶解的包涵体溶液应
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