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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
1年
- 英文名:
Two-Step RT-PCR Kit(0.2-12kb,M-MLV)
- 库存:
999
- 供应商:
百生跃
- 规格:
25T/50T/100T
| 规格: | 25T | 产品价格: | ¥1000 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 50T | 产品价格: | ¥1600 |
| 规格: | 100T | 产品价格: | ¥2800 |
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文献和实验的处理加强了SuperScriptⅡ或AMV合成的cDNA所产生的信号。对于多数RT-PCR反应,RNaseH处理是可选的,因为95℃保温的PCR变性步骤一般会将RNA:DNA复合物中的RNA水解掉。 图7 RNaseH处理对RT-PCR的影响 使用SuperScriptⅡ(S)、M-MLV(M)或AMV(A),由5μg Hela RNA合成人tuberous sclerosisⅡmRNA(5.3kb)的全长cDNA,反应产物的一半使用RnasH处理30
要的所有组分。可以用来从低至0.1pg的总RNA中检测看家基因(housekeeping genes)(见图2),以及通过RT-PCR从长达12kb的靶标中合成高产量的cDNA。 在室温度下运输、贮存和组合反应混合物,使得这个RTS试剂盒成为进行多种RT-PCR应用的理想选择。 图2-SuperScript™III RTS First-Strand Synthesis System以方便的形式提供高灵敏度 使用
温度,对 SuperScriptⅡ可以到 50℃,对 ThermoScript 可以到 65℃。 注意:不要在>60℃ 时使用 oligo(dT) 引物,选择一个在反应温度可以退火的 GSP。对于>1kb 的 RT-PCR 产物,保持反应温度≤65℃。不要在高于 37℃ 时使用 M-MLV。如果不需要全长 cDNA,在第一链反应中使用随机引物。 引物或模板对残余的 RNA 模板敏感 在 PCR 前用 RNaseH 处理。靶序列在分析的组织中不表达 尝试其他靶序列或组织。PCR 没有起作用 对两步法
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