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- Xybio
- 上海
- P1497
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
M15(pREP4)
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：M15(pREP4)大肠表达菌
别称: M15(pREP4)
抗性：Kan
培养基：LB
菌株类别：大肠杆菌
培养条件：37℃，有氧
质粒转化：42℃热激
保存方式：20%甘油，-20℃
基本应用：pQE系列载体的蛋白表达
质粒简介
M15菌株细胞含有包含反式lac 抑制子的pREP4质粒，保证高度调控的表达。M15[pREP4]菌株携带有阻抑质粒pREP4,该质粒高水平的表达lac抑制子,在IPTG诱导前反式抑制蛋白表达. 通过卡那霉素抗性筛选可以保持pREP4质粒在菌株中的稳定性。对M15使用LB，在37℃有氧的环境下培养，42℃热激处理可将质粒成功转入M15中，通常的情况下，使用IPTG可使菌株进行高效的蛋白表达。
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0881/pBABE-neo-largeTcDNA逆转录表达质粒 |
| P0978/pSIREN-retroQ逆转录表达质粒 |
| P0979/pSuper.Retro.Puro-stuffer逆转录干扰质粒 |
| P0473/pLXSN逆转录表达质粒 |
| P0947/pMXSpuro-GFP逆转录表达质粒 |
| P1073/pMSCV-IRES-GFP II (pMIG II) 逆转录表达质粒 |
| P1391/pEYK3.1逆转录表达质粒 |
| P4935/MSGV Hu Acceptor PGK-NGFR逆转录表达质粒 |
| P0447/pCMV-Gag-pol逆转录包装质粒 |
| P0334/pCL-Eco逆转录包装质粒 |
| P1257/pCL-Ampho逆转录包装质粒 |
| P2502/pCL-10A1逆转录包装质粒 |
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文献和实验(see table). Expression vector appropriate host strain pBAD vectors Top10, LMG194 pET vectors BL21 (DE3) pGEX vectors BL21 pMal vectors BL21, TB1 pProEx vectors BL21, DH10B pQE vectors M15 or M15 [pREP4] pRSET vectors BL21 (DE3) pLysS
之前已分别构筑出GUS 基因的表现质体pQG11,若要令启动子T5promotor 的启动受到更好的调控，应进一步将pQG11 转形至大肠杆菌M15[pREP4]. M15[pREP4] 可持续表现lac repressor,pQG11 上用以驱动GUS基因表现的T5 promoter 的活性将因而受到抑制，但一旦加入IPTG 就能诱导GUS基因大量表现。 在这一节的实验里，我们将分别自经IPTG 诱导与未经诱导的pQG11/M15[pREP4] 菌体抽取total RNA,以便以北方杂合反应
1.仪器用具： （1）恒温震荡培养箱37℃； （2）高速冷冻离心机及离心管（使用20,000 rpm离心陀）； （3）液态氮及冰筒； （4）37℃水浴锅 使用高速离心机要注意： 离心机及离心陀的温度要预冷完全，相对位置的两只离心管要平衡好，离心陀转速绝对不能超过最高速限； 2.药品试剂： （1）转型菌株pQG11/M15 [pREP] 单一菌落； （2）LB/amp/kan 及IPTG （1 M stock）； （3）Lysis buffer （50 mM Na3PO4·12
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