Origami B(DE3)大肠表达菌

基本信息
名称：Origami B(DE3)大肠表达菌
别称: Origami B(DE3) Strain
抗性：Kan/Tet
培养基：LB
菌株类别：大肠杆菌
培养条件：37℃，有氧，LB
质粒转化：42℃热激
保存方式：20%甘油，-20℃
基本应用：用于蛋白表达
备注：
质粒简介
 OrigamiB(DE3)属于大肠杆菌表达型菌种，可使用LB培养基在37℃有氧的条件下进行培养，OrigamiB(DE3)的感受态细胞可以在42℃下热激处理转化质粒。使用IPTG可以诱导目的基因高效表达。
OrigamiB系列菌株同样具有Origami系列菌株含有的trxB/gor基因突变，但是该菌株是来源于BL21的lacZY基因突变株。所以，OrigamiB系列菌株是集合BL21，Tuner和Origami三种菌株的优点于一身。在thioredoxinreductase(trxB)和glutathionereductase(gor)基因上同时含有突变，这使得该菌株能够更加高效的在细胞质内生成二硫键，有助于含二硫键蛋白的活性蛋白形成。TrxB和Gor基因突变使得质粒能够分别具有卡那和四环素抗性，所以本菌株无法用于卡那和四环素抗性质粒的蛋白表达。DE3是溶源性的λDE3,所以在lacUV5启动子下携带有T7RNA聚合酶的染色体拷贝，因此该菌株适用于pET系列载体，及其他T7启动子系列载体。

质粒图谱


质粒序列：详询


质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P1671/pBK-VQR-BE3哺乳编辑质粒

P1672/pBK-VRER-BE3哺乳编辑质粒

P2021/pBK-YEE-BE3哺乳编辑质粒

P1673/SaBE4-Gam哺乳编辑质粒

P1674/BE4-Gam哺乳编辑质粒

P4948/pC015 - dLwCas13a-NF哺乳编辑质粒

P4949/pC016 - LwCas13a guide expression backbone with U6 promoter哺乳编辑质粒

P2887/pC034 - LwCas13a-msfGFP-2A-Blast哺乳编辑质粒

P2166/pC0043-PspCas13b crRNA backbone哺乳编辑质粒

P2167/pC0046-EF1a-PspCas13b-NES-HIV哺乳编辑质粒

P2022/pC0055-CMV-dPspCas13b-GS-ADAR2DD(E488Q/T375G)-delta-984-1090哺乳编辑质粒