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- Xybio
- 上海
- P1481
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
TB1 Strain
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：TB1大肠表达菌
别称: TB1 Strain
抗性：Str
培养基：LB
菌株类别：大肠杆菌
培养条件：37℃，有氧，LB
质粒转化：42℃热激
保存方式：20%甘油，-20℃
基本应用：用于蛋白表达
备注：
质粒简介
TB1来源于JM 83，是JM 83 hsdR型，只含有大肠杆菌RNA polymerase，缺少 BL21 (DE3)菌株的 T7 RNA polymerase，适合NEB公司的pMAL 系列质粒原核蛋白表达(The pMAL vectors use the E. coli RNA polymerase)，不能用于pET系列质粒的表达，具有链霉素抗性。
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0111/pX601哺乳编辑质粒 |
| P0112/pX602哺乳编辑质粒 |
| P2500/pX603哺乳编辑质粒 |
| P0113/pLentiCRISPR 哺乳编辑质粒 |
| P0114/pLentiCRISPR V2哺乳编辑质粒 |
| P0889/pLentiCRISPR-E哺乳编辑质粒 |
| P1289/LentiCRISPRV2GFP哺乳编辑质粒 |
| P0115/pLentiGuide-Puro哺乳编辑质粒 |
| P0805/pLentiCas9-Blast哺乳编辑质粒 |
| P0117/lenti dCAS-VP64_Blast哺乳编辑质粒 |
| P1595/Lenti-dCas9-KRAB-blast哺乳编辑质粒 |
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文献和实验上，而质粒是一种可转移的环状 DNA，很容易在不同菌株之间传递和交换遗传物质。 人随身携带十倍于细胞数的微生物，有益菌也有有害菌； 如果调皮的质粒带着基因在这些微生物中乱窜； 那我们的健康真是时时刻刻受到威胁！！！ 对于身体健康而言真可谓 美国微生物学会刊物《抗生素与化疗》中一篇文章指出，E.coli MRSN 388634 的质粒中编码了包括 MCR-1 在内的 15 种耐药基因，但 E.coli MRSN 388634 并非对所有抗
入培养基30℃摇一段时间，可以取部分涂板（不同浓度抗生素），或者也有人将菌短暂离心，弃去上清，剩余全部涂板以保证转化率。 （化学转化） 如果没有电转仪，LiCl转化是一种可供选择的方法，转化率是102到103cfu/ug。 主要过程为： 取过夜活化培养的菌液按1：1000接种于15ml新鲜的YPD液体培养基，30℃培养至OD600达到0.8-1.0；4℃，4500rpm离心5分钟，用8ml冰预冷的无菌水洗涤菌体，倾除洗涤液，用1ml ，4℃，4500rpm离心5分钟，沉淀用50μl冰预冷的100
降低转化的数量级，虽然不一定可信，但是我个人也认为这个过程要快，电转后可以看看时间，如果时间过短(比如〈4)就可能说明杂质较多，会影响转化率; ⑤转化后温育是个增加同源重组，增加存活率的过程，需要注意不要感染了大肠杆菌，再加入培养基30℃摇一段时间，可以取部分涂板(不同浓度抗生素)，或者也有人将菌短暂离心，弃去上清，剩余全部涂板以保证转化率。 (化学转化) 如果没有电转仪，LiCl转化是一种可供选择的方法，转化率是102到103cfu/ug。 主要
