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- Xybio
- 上海
- P1480
- 2025年06月29日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
AD494(DE3) Strain
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：AD494(DE3)大肠表达菌
别称: AD494(DE3) Strain
抗性：Kan
培养基：LB
菌株类别：大肠杆菌
培养条件：37℃，有氧，LB
质粒转化：42℃热激
保存方式：20%甘油，-20℃
基本应用：用于蛋白表达
备注：
质粒简介
AD494菌株来源于K12菌，AD494菌株含有thioredoxin reductase (TrxB)基因突变，有利于细菌胞内的二硫键形成，能够帮助蛋白形成正确的三维折叠，形成有功能活力的蛋白。AD494菌株中的thioredoxin reductase (TrxB)突变具有卡那霉素抗性，因此该宿主菌只能用于氨苄或者其他非卡那霉素抗性的质粒，进行基因蛋白表达。
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0123/pX330哺乳编辑质粒 |
| P4860/pX333哺乳编辑质粒 |
| P0106/pX334哺乳编辑质粒 |
| P0735/pX335哺乳编辑质粒 |
| P1748/pX405哺乳编辑质粒 |
| P0107/pX458哺乳编辑质粒 |
| P4204/pX458M哺乳编辑质粒 |
| P0108/pX459哺乳编辑质粒 |
| P1414/pX459M哺乳编辑质粒 |
| P0109/pX459 V2.0哺乳编辑质粒 |
| P0327/pX461哺乳编辑质粒 |
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文献和实验(see table). Expression vector appropriate host strain pBAD vectors Top10, LMG194 pET vectors BL21 (DE3) pGEX vectors BL21 pMal vectors BL21, TB1 pProEx vectors BL21, DH10B pQE vectors M15 or M15 [pREP4] pRSET vectors BL21 (DE3) pLysS
产生少量溶菌酶，而 pLysE 宿主菌产生更大量酶。这些菌株用于在诱导前抑制 T7 RNA 聚合酶的基础表达，这样可以稳定编码影响细胞生长和活力的目标蛋白的 pET 重组体。带有 pLacI 的宿主菌产生额外的抑制 pETBlue 和 pTriEx 载体基础表达的 lac 阻遏蛋白。 λ DE3 溶原化试剂盒用于制备其它遗传背景的新表达宿主菌。 AD494 菌株为硫氧还蛋白还原酶 ( trxB ) 突变菌株，能够在胞浆内形成二硫键，提供了生产正确折迭的活性蛋白的潜力。 TrxB 突变可用
Protein Chip for Detection of DNA Mutations
gene to the vector pET32a (+) sequentially with insertion of a (Ser-Gly)6 coding sequence before and behind Strep tagII gene, respectively. The fusion protein THLSLM was expressed in Escherichia coli AD494 (DE3) and purified using Ni2+ -chelation
