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- Xybio
- 上海
- P0834
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pMac-H
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pMac-H质粒
别称: pMac-H
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 质粒分类: | 其他宿主载体 |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达,抗体表达 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pMac-H质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0941/pT7-His大肠表达质粒 |
| P1034/pETG-30A大肠表达质粒 |
| P1350/pT7-His-MCS大肠表达质粒 |
| P1769/pET His6 MBP TEV LIC cloning vector (1M)大肠表达质粒 |
| P4853/pET His6 Sumo TEV LIC cloning vector (1S)大肠表达质粒 |
| P4854/pET His6 Sumo TEV LIC cloning vector (2S-T)大肠表达质粒 |
| P0063/pMal-c2X大肠表达质粒 |
| P0064/pMal-p2X大肠表达质粒 |
| P1362/pMal-c4X大肠表达质粒 |
| P0347/pMal-c5X大肠表达质粒 |
| P0065/pMal-p5X大肠表达质粒 |
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文献和实验siRNA 设计的靶点不好，一般情况下公司都是三保一，所以有一些确实存在敲不下来，或者过表达的质粒太长，例如基因长度大于 4000bp 的一般过表达效率不高。 2）这些质粒或者 siRNA 过期了。 3）转染的时间太短，或者 siRNA 或者质粒给的浓度太低，可以延长转染的时间，例如 4~6h 换液，改成 8h 换液。或者加大质粒或者 siRNA 浓度，例如之前给以 5ul，现在可以加 7.5 或者 10ul。 师兄，转进去细胞全死了？ 答：是不是细胞状态不好，还有可能
至总体积 10 ul混合后置 14～16 ℃ 水浴 6～12 h。【注意事项】1）通常 DNA 插入片段与载体 DNA 的摩尔比为 3:1 或 2:1，需根据 DNA 分子量计算，而不取决于浓度；2）平齐末端连接时，插入片段的量要远远大于载体 DNA 的量，可以为 5:1 或更多，即使这样，连接效率仍然很低。3）有时 DNA 一端是粘端，另一端是平端，这种连接与双酶切粘端连接相似；4）不匹配末端需要连接时，首先要将末端处理成平端，然后再进行连接反应。六、重组质粒的转化【实验目的】学习和掌握感受
：1）转染 siRNA 设计的靶点不好，一般情况下公司都是三保一，所以有一些确实存在敲不下来，或者过表达的质粒太长，例如基因长度大于 4000bp 的一般过表达效率不高。2）这些质粒或者 siRNA 过期了3）转染的时间太短，或者 siRNA 或者质粒给的浓度太低，可以延长转染的时间，例如 4-6h 换液，改成 8h 换液。或者加大质粒或者 siRNA 浓度，例如之前给以 5ul，现在可以加 7.5 或者 10ul。3. 师兄，转进去细胞全死了?答：是不是细胞状态不好，还有可能
