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- Xybio
- 上海
- P0335
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pHH43
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pHH43菌蜕制备质粒
别称: pHH43
| 启动子: | CatGC |
|---|---|
| 复制子: | colE1 ori |
| 质粒分类: | 大肠杆菌菌蜕制备质粒 |
| 原核抗性: | Chl |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 30度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 广宿主 |
|---|---|
| 载体用途： | |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | |
| 原核抗性： | Chl |
| 筛选标记： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pHH43是构建有φX174噬菌体裂解蛋白的温控型表达质粒。该质粒可以转化入大肠杆菌DH5α中,诱导细菌裂解制备大肠杆菌DH5α菌蜕。在大肠杆菌杆菌上面打孔制造菌影，那段基因的酶切位点是kpn i和EcoR V，由于含有E裂解基因，超过38度就可以引发，所以培养最好30度左右。
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0914/pET28b-TEV-6×His大肠表达质粒 |
| P0754/pET28GST-LIC大肠表达质粒 |
| P0030/pET-29a大肠表达质粒 |
| P0713/pET-29b大肠表达质粒 |
| P0031/pET-30a大肠表达质粒 |
| P0449/pET30a-EcoRV大肠表达质粒 |
| P2187/pET-30b大肠表达质粒 |
| P1868/pET-30c大肠表达质粒 |
| P0032/pET-31b大肠表达质粒 |
| P0033/pET-32a大肠表达质粒 |
| P0034/pET-32b大肠表达质粒 |
| P0326/pET-32c大肠表达质粒 |
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文献和实验的突变。 通过 PCR 进行基因分型也是对癌症和遗传病中的 突变进行遗传分析的一个基本方式。 3.分子克隆 PCR 被广泛应用于目标 DNA 片段的克隆，该技术被称为 PCR 克隆。在直接 PCR 克隆中，DNA（如，gDNA、cDNA、质粒 DNA）的目标区域被扩增并插入到特殊设计的兼容载体中。 图 4.PCR 克隆：通过 PCR 制备的插入片段被克隆到兼容载体中。（A） 直接 PCR 克隆技术包括 TA 和平端克隆。（B）间接 PCR 克隆，扩增子可在插入到兼容载体之前被修饰，如进行限制
骨髓细胞，病毒DNA插入宿主细胞基因组，基因的活性得到表达。这时，由于骨髓细胞里面没有辅助病毒，所以整合进宿主基因组的逆转录病毒，不再有外壳蛋白可供包装，因此也就无法增殖，而只能被“陷”在宿主基因组中，通过细胞分裂而传给下一代子细胞。三、柯斯质粒 1978年Collins和Hohn构建一种新型的大肠杆菌克隆载体，命名为cosmid（柯斯质粒）。它是用正常的质粒同噬菌体λ的cos位点构成。例如，柯斯质粒pHC79系由质粒pBR322和噬菌体λ的cos位点的一段DNA构成（图23-5），全长43.kb。在包装
很多新手在问做原核表达需要考虑的载体和菌株的选择，现系统地解答一下，供新手借鉴。
DE3 溶原化试剂盒用于制备其它遗传背景的新表达宿主菌。 AD494 菌株为硫氧还蛋白还原酶 ( trxB ) 突变菌株，能够在胞浆内形成二硫键，提供了生产正确折迭的活性蛋白的潜力。 TrxB 突变可用卡那霉素选择，因此该菌株建议用于带氨苄抗性标记 bla 的质粒。 B834 为 BL21 的亲本菌株。这些蛋白酶缺陷宿主菌为甲硫氨酸营养缺陷型，可用 35 S- 甲硫氨酸和硒代甲硫氨酸对目标蛋白进行高特异活性标记，从而用于结晶学研究。 BL21 应用最广的宿主菌来源，具有 lon
