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2年
- 英文名：
pMP2444
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pMP2444广宿主荧光表达质粒
别称: pMP2444
质粒属性
质粒简介
pMP2444是一个广宿主原核绿色荧光蛋白表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5471 bp ds-DNA circular SYN 04-DEC-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5471
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
CDS complement(261..794)
/codon_start=1
/gene="aacC1"
/product="gentamycin acetyltransferase"
/label=Gen
/note="confers resistance to gentamycin"
/translation="MLRSSNDVTQQGSRPKTKLGGSSMGIIRTCRLGPDQVKSMRAALD
LFGREFGDVATYSQHQPDSDYLGNLLRSKTFIALAAFDQEAVVGALAAYVLPRFEQPRS
EIYIYDLAVSGEHRRQGIATALINLLKHEANALGAYVIYVQADYGDDPAVALYTKLGIR
EEVMHFDIDPSTAT"
promoter complement(983..1011)
/gene="intI1 (promoter lies within the coding sequence)"
/label=Pc promoter
/note="class 1 integron promoter"
protein_bind 1281..1302
/label=CAP binding site
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
promoter 1317..1347
/label=lac promoter
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 1355..1371
/label=lac operator
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter 1416..1434
/label=T3 promoter
/note="promoter for bacteriophage T3 RNA polymerase"
misc_feature 1447..1518
/label=MCS
CDS 1520..2239
/codon_start=1
/product="enhanced GFP"
/label=EGFP
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
CDS complement(3017..3679)
/codon_start=1
/product="replication protein for the broad-host-range
plasmid pBBR1 from Bordetella bronchiseptica"
/label=pBBR1 Rep
/translation="MATQSREIGIQAKNKPGHWVQTERKAHEAWAGLIARKPTAAMLLH
HLVAQMGHQNAVVVSQKTLSKLIGRSLRTVQYAVKDLVAERWISVVKLNGPGTVSAYVV
NDRVAWGQPRDQLRLSVFSAAVVVDHDDQDESLLGHGDLRRIPTLYPGEQQLPTGPGEE
PPSQPGIPGMEPDLPALTETEEWERRGQQRLPMPDEPCFLDDGEPLEPPTRVTLPRR"
rep_origin 3680..4449
/label=pBBR1 oriV
/note="replication origin of the broad-host-range plasmid
pBBR1 from Bordetella bronchiseptica; requires the pBBR1
Rep protein for replication"
ORIGIN
1 accttcggga gcgcctgaag cccgttctgg acgccctggg gccgttgaat cgggatatgc
61 aggccaaggc cgccgcgatc atcaaggccg tgggcgaaaa gctgctgacg gaacagcggg
121 aagtccagcg ccagaaacag gcccagcgcc agcaggaacg cgggcgcgca catttccccg
181 aaaagtgcca cctggcggcg ttgtgacaat ttaccgaaca actccgcggc cgggaagccg
241 atctcggctt gaacgaattg ttaggtggcg gtacttgggt cgatatcaaa gtgcatcact
301 tcttcccgta tgcccaactt tgtatagaga gccactgcgg gatcgtcacc gtaatctgct
361 tgcacgtaga tcacataagc accaagcgcg ttggcctcat gcttgaggag attgatgagc
421 gcggtggcaa tgccctgcct ccggtgctcg ccggagactg cgagatcata gatatagatc
481 tcactacgcg gctgctcaaa cctgggcaga acgtaagccg cgagagcgcc aacaaccgct
541 tcttggtcga aggcagcaag cgcgatgaat gtcttactac ggagcaagtt cccgaggtaa
601 tcggagtccg gctgatgttg ggagtaggtg gctacgtctc cgaactcacg accgaaaaga
661 tcaagagcag cccgcatgga tttgacttgg tcagggccga gcctacatgt gcgaatgatg
721 cccatacttg agccacctaa ctttgtttta gggcgactgc cctgctgcgt aacatcgttg
781 ctgctgcgta acatcgttgc tgctccataa catcaaacat cgacccacgg cgtaacgcgc
841 ttgctgcttg gatgcccgag gcatagactg tacaaaaaaa cagtcataac aagccatgaa
901 aaccgccact gcgccgttac caccgctgcg ttcggtcaag gttctggacc agttgcgtga
961 gcgcatacgc tacttgcatt acagtttacg aaccgaacag gcttatgtca actgggttcg
1021 tgccttcatc cgtttccacg gtgtgcgtcc atgggcaaat attatacgca aggcgacaag
1081 gtgctgatgc cgctggcgat tcaggttcat catgccgttt gtgatggctt ccatgtcggc
1141 agaatgctta atgaattaca acagttttta tgcatgcgcc caatacgcaa accgcctctc
1201 cccgcgcgtt ggccgattca ttaatgcagc tggcacgaca ggtttcccga ctggaaagcg
1261 ggcagtgagc gcaacgcaat taatgtgagt tagctcactc attaggcacc ccaggcttta
1321 cactttatgc ttccggctcg tatgttgtgt ggaattgtga gcggataaca atttcacaca
1381 ggaaacagct atgaccatga ttacgccaag cgcgcaatta accctcacta aagggaacaa
1441 aagctgggta ccgggccccc cctcgaggtc gacggtatcg ataagcttga tatcgaattc
1501 ctgcagcccg ggggatccaa tggtgagcaa gggcgaggag ctgttcaccg gggtggtgcc
1561 catcctggtc gagctggacg gcgacgtaaa cggccacaag ttcagcgtgt ccggcgaggg
1621 cgagggcgat gccacctacg gcaagctgac cctgaagttc atctgcacca ccggcaagct
1681 gcccgtgccc tggcccaccc tcgtgaccac cctgacctac ggcgtgcagt gcttcagccg
1741 ctaccccgac cacatgaagc agcacgactt cttcaagtcc gccatgcccg aaggctacgt
1801 ccaggagcgc accatcttct tcaaggacga cggcaactac aagacccgcg ccgaggtgaa
1861 gttcgagggc gacaccctgg tgaaccgcat cgagctgaag ggcatcgact tcaaggagga
1921 cggcaacatc ctggggcaca agctggagta caactacaac agccacaacg tctatatcat
1981 ggccgacaag cagaagaacg gcatcaaggt gaacttcaag atccgccaca acatcgagga
2041 cggcagcgtg cagctcgccg accactacca gcagaacacc cccatcggcg acggccccgt
2101 gctgctgccc gacaaccact acctgagcac ccagtccgcc ctgagcaaag accccaacga
2161 gaagcgcgat cacatggtcc tgctggagtt cgtgaccgcc gccgggatca ctctcggcat
2221 ggacgagctg tacaagtagt ctagattagt ggagctccaa ttcgccctat agtgagtcgt
2281 attacgcgcg ctcactggcc gtcgttttac aacgtcgtga ctgggaaaac cctggcgtta
2341 cccaacttaa tcgccttgca gcacatcccc ctttcgccag ctggcgtaat agcgaagagg
2401 cccgcaccga tcgcccttcc caacagttgc gcagcctgaa tggcgaatgg aaattgtaag
2461 cgttaatatt ttgttaaaat tcgcgttaaa tttttgttaa atcagctcat tttttaacca
2521 ataggccgac tgcgatgagt ggcagggcgg ggcgtaattt ttttaaggca gttattggtg
2581 cccttaaacg cctggtgcta cgcctgaata agtgataata agcggatgaa tggcagaaat
2641 tcgaaagcaa attcgacccg gtcgtcggtt cagggcaggg tcgttaaata gccgcttatg
2701 tctattgctg gtttaccggt ttattgacta ccggaagcag tgtgaccgtg tgcttctcaa
2761 atgcctgagg ccagtttgct caggctctcc ccgtggaggt aataattgac gatatgatca
2821 tttattctgc ctcccagagc ctgataaaaa cggtgaatcc gttagcgagg tgccgccggc
2881 ttccattcag gtcgaggtgg cccggctcca tgcaccgcga cgcaacgcgg ggaggcagac
2941 aaggtatagg gcggcgaggc ggctacagcc gatagtctgg aacagcgcac ttacgggttg
3001 ctgcgcaacc caagtgctac cggcgcggca gcgtgacccg tgtcggcggc tccaacggct
3061 cgccatcgtc cagaaaacac ggctcatcgg gcatcggcag gcgctgctgc ccgcgccgtt
3121 cccattcctc cgtttcggtc aaggctggca ggtctggttc catgcccgga atgccgggct
3181 ggctgggcgg ctcctcgccg gggccggtcg gtagttgctg ctcgcccgga tacagggtcg
3241 ggatgcggcg caggtcgcca tgccccaaca gcgattcgtc ctggtcgtcg tgatcaacca
3301 ccacggcggc actgaacacc gacaggcgca actggtcgcg gggctggccc cacgccacgc
3361 ggtcattgac cacgtaggcc gacacggtgc cggggccgtt gagcttcacg acggagatcc
3421 agcgctcggc caccaagtcc ttgactgcgt attggaccgt ccgcaaagaa cgtccgatga
3481 gcttggaaag tgtcttctgg ctgaccacca cggcgttctg gtggcccatc tgcgccacga
3541 ggtgatgcag cagcattgcc gccgtgggtt tcctcgcaat aagcccggcc cacgcctcat
3601 gcgctttgcg ttccgtttgc acccagtgac cgggcttgtt cttggcttga atgccgattt
3661 ctctggactg cgtggccatg cttatctcca tgcggtaggg tgccgcacgg ttgcggcacc
3721 atgcgcaatc agctgcaact tttcggcagc gcgacaacaa ttatgcgttg cgtaaaagtg
3781 gcagtcaatt acagattttc tttaacctac gcaatgagct attgcggggg gtgccgcaat
3841 gagctgttgc gtacccccct tttttaagtt gttgattttt aagtctttcg catttcgccc
3901 tatatctagt tctttggtgc ccaaagaagg gcacccctgc ggggttcccc cacgccttcg
3961 gcgcggctcc ccctccggca aaaagtggcc cctccggggc ttgttgatcg actgcgcggc
4021 cttcggcctt gcccaaggtg gcgctgcccc cttggaaccc ccgcactcgc cgccgtgagg
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4141 gttccaggcg cgtcaaggcc aagccgctgc gcggtcgctg cgcgagcctt gacccgcctt
4201 ccacttggtg tccaaccggc aagcgaagcg cgcaggccgc aggccggagg cttttcccca
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4501 cgcagggcga agcccggaga gcaagcccgt agggcgccgc agccgccgta ggcggtcacg
4561 actttgcgaa gcaaagtcta gtgagtatac tcaagcattg agtggcccgc cggaggcacc
4621 gccttgcgct gcccccgtcg agccggttgg acaccaaaag ggaggggcag gcatggcggc
4681 atacgcgatc atgcgatgca agaagctggc gaaaatgggc aacgtggcgg ccagtctcaa
4741 gcacgcctac cgcgagcgcg agacgcccaa cgctgacgcc agcaggacgc cagagaacga
4801 gcactgggcg gccagcagca ccgatgaagc gatgggccga ctgcgcgagt tgctgccaga
4861 gaagcggcgc aaggacgctg tgttggcggt cgagtacgtc atgacggcca gcccggaatg
4921 gtggaagtcg gccagccaag aacagcaggc ggcgttcttc gagaaggcgc acaagtggct
4981 ggcggacaag tacggggcgg atcgcatcgt gacggccagc atccaccgtg acgaaaccag
5041 cccgcacatg accgcgttcg tggtgccgct gacgcaggac ggcaggctgt cggccaagga
5101 gttcatcggc aacaaagcgc agatgacccg cgaccagacc acgtttgcgg ccgctgtggc
5161 cgatctaggg ctgcaacggg gcatcgaggg cagcaaggca cgtcacacgc gcattcaggc
5221 gttctacgag gccctggagc ggccaccagt gggccacgtc accatcagcc cgcaagcggt
5281 cgagccacgc gcctatgcac cgcagggatt ggccgaaaag ctgggaatct caaagcgcgt
5341 tgagacgccg gaagccgtgg ccgaccggct gacaaaagcg gttcggcagg ggtatgagcc
5401 tgccctacag gccgccgcag gagcgcgtga gatgcgcaag aaggccgatc aagcccaaga
5461 gacggcccga g
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pMP2444广宿主荧光表达质粒
别称: pMP2444
| 启动子: | Lac |
|---|---|
| 原核抗性: | Gen |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 广宿主 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | |
| 原核抗性： | Gen |
| 筛选标记： | |
| 荧光蛋白： | 绿色 |
质粒简介
pMP2444是一个广宿主原核绿色荧光蛋白表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5471 bp ds-DNA circular SYN 04-DEC-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5471
/organism="synthetic DNA construct"
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CDS complement(261..794)
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/gene="aacC1"
/product="gentamycin acetyltransferase"
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/translation="MLRSSNDVTQQGSRPKTKLGGSSMGIIRTCRLGPDQVKSMRAALD
LFGREFGDVATYSQHQPDSDYLGNLLRSKTFIALAAFDQEAVVGALAAYVLPRFEQPRS
EIYIYDLAVSGEHRRQGIATALINLLKHEANALGAYVIYVQADYGDDPAVALYTKLGIR
EEVMHFDIDPSTAT"
promoter complement(983..1011)
/gene="intI1 (promoter lies within the coding sequence)"
/label=Pc promoter
/note="class 1 integron promoter"
protein_bind 1281..1302
/label=CAP binding site
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
promoter 1317..1347
/label=lac promoter
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 1355..1371
/label=lac operator
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter 1416..1434
/label=T3 promoter
/note="promoter for bacteriophage T3 RNA polymerase"
misc_feature 1447..1518
/label=MCS
CDS 1520..2239
/codon_start=1
/product="enhanced GFP"
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/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
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GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
CDS complement(3017..3679)
/codon_start=1
/product="replication protein for the broad-host-range
plasmid pBBR1 from Bordetella bronchiseptica"
/label=pBBR1 Rep
/translation="MATQSREIGIQAKNKPGHWVQTERKAHEAWAGLIARKPTAAMLLH
HLVAQMGHQNAVVVSQKTLSKLIGRSLRTVQYAVKDLVAERWISVVKLNGPGTVSAYVV
NDRVAWGQPRDQLRLSVFSAAVVVDHDDQDESLLGHGDLRRIPTLYPGEQQLPTGPGEE
PPSQPGIPGMEPDLPALTETEEWERRGQQRLPMPDEPCFLDDGEPLEPPTRVTLPRR"
rep_origin 3680..4449
/label=pBBR1 oriV
/note="replication origin of the broad-host-range plasmid
pBBR1 from Bordetella bronchiseptica; requires the pBBR1
Rep protein for replication"
ORIGIN
1 accttcggga gcgcctgaag cccgttctgg acgccctggg gccgttgaat cgggatatgc
61 aggccaaggc cgccgcgatc atcaaggccg tgggcgaaaa gctgctgacg gaacagcggg
121 aagtccagcg ccagaaacag gcccagcgcc agcaggaacg cgggcgcgca catttccccg
181 aaaagtgcca cctggcggcg ttgtgacaat ttaccgaaca actccgcggc cgggaagccg
241 atctcggctt gaacgaattg ttaggtggcg gtacttgggt cgatatcaaa gtgcatcact
301 tcttcccgta tgcccaactt tgtatagaga gccactgcgg gatcgtcacc gtaatctgct
361 tgcacgtaga tcacataagc accaagcgcg ttggcctcat gcttgaggag attgatgagc
421 gcggtggcaa tgccctgcct ccggtgctcg ccggagactg cgagatcata gatatagatc
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541 tcttggtcga aggcagcaag cgcgatgaat gtcttactac ggagcaagtt cccgaggtaa
601 tcggagtccg gctgatgttg ggagtaggtg gctacgtctc cgaactcacg accgaaaaga
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721 cccatacttg agccacctaa ctttgtttta gggcgactgc cctgctgcgt aacatcgttg
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1681 gcccgtgccc tggcccaccc tcgtgaccac cctgacctac ggcgtgcagt gcttcagccg
1741 ctaccccgac cacatgaagc agcacgactt cttcaagtcc gccatgcccg aaggctacgt
1801 ccaggagcgc accatcttct tcaaggacga cggcaactac aagacccgcg ccgaggtgaa
1861 gttcgagggc gacaccctgg tgaaccgcat cgagctgaag ggcatcgact tcaaggagga
1921 cggcaacatc ctggggcaca agctggagta caactacaac agccacaacg tctatatcat
1981 ggccgacaag cagaagaacg gcatcaaggt gaacttcaag atccgccaca acatcgagga
2041 cggcagcgtg cagctcgccg accactacca gcagaacacc cccatcggcg acggccccgt
2101 gctgctgccc gacaaccact acctgagcac ccagtccgcc ctgagcaaag accccaacga
2161 gaagcgcgat cacatggtcc tgctggagtt cgtgaccgcc gccgggatca ctctcggcat
2221 ggacgagctg tacaagtagt ctagattagt ggagctccaa ttcgccctat agtgagtcgt
2281 attacgcgcg ctcactggcc gtcgttttac aacgtcgtga ctgggaaaac cctggcgtta
2341 cccaacttaa tcgccttgca gcacatcccc ctttcgccag ctggcgtaat agcgaagagg
2401 cccgcaccga tcgcccttcc caacagttgc gcagcctgaa tggcgaatgg aaattgtaag
2461 cgttaatatt ttgttaaaat tcgcgttaaa tttttgttaa atcagctcat tttttaacca
2521 ataggccgac tgcgatgagt ggcagggcgg ggcgtaattt ttttaaggca gttattggtg
2581 cccttaaacg cctggtgcta cgcctgaata agtgataata agcggatgaa tggcagaaat
2641 tcgaaagcaa attcgacccg gtcgtcggtt cagggcaggg tcgttaaata gccgcttatg
2701 tctattgctg gtttaccggt ttattgacta ccggaagcag tgtgaccgtg tgcttctcaa
2761 atgcctgagg ccagtttgct caggctctcc ccgtggaggt aataattgac gatatgatca
2821 tttattctgc ctcccagagc ctgataaaaa cggtgaatcc gttagcgagg tgccgccggc
2881 ttccattcag gtcgaggtgg cccggctcca tgcaccgcga cgcaacgcgg ggaggcagac
2941 aaggtatagg gcggcgaggc ggctacagcc gatagtctgg aacagcgcac ttacgggttg
3001 ctgcgcaacc caagtgctac cggcgcggca gcgtgacccg tgtcggcggc tccaacggct
3061 cgccatcgtc cagaaaacac ggctcatcgg gcatcggcag gcgctgctgc ccgcgccgtt
3121 cccattcctc cgtttcggtc aaggctggca ggtctggttc catgcccgga atgccgggct
3181 ggctgggcgg ctcctcgccg gggccggtcg gtagttgctg ctcgcccgga tacagggtcg
3241 ggatgcggcg caggtcgcca tgccccaaca gcgattcgtc ctggtcgtcg tgatcaacca
3301 ccacggcggc actgaacacc gacaggcgca actggtcgcg gggctggccc cacgccacgc
3361 ggtcattgac cacgtaggcc gacacggtgc cggggccgtt gagcttcacg acggagatcc
3421 agcgctcggc caccaagtcc ttgactgcgt attggaccgt ccgcaaagaa cgtccgatga
3481 gcttggaaag tgtcttctgg ctgaccacca cggcgttctg gtggcccatc tgcgccacga
3541 ggtgatgcag cagcattgcc gccgtgggtt tcctcgcaat aagcccggcc cacgcctcat
3601 gcgctttgcg ttccgtttgc acccagtgac cgggcttgtt cttggcttga atgccgattt
3661 ctctggactg cgtggccatg cttatctcca tgcggtaggg tgccgcacgg ttgcggcacc
3721 atgcgcaatc agctgcaact tttcggcagc gcgacaacaa ttatgcgttg cgtaaaagtg
3781 gcagtcaatt acagattttc tttaacctac gcaatgagct attgcggggg gtgccgcaat
3841 gagctgttgc gtacccccct tttttaagtt gttgattttt aagtctttcg catttcgccc
3901 tatatctagt tctttggtgc ccaaagaagg gcacccctgc ggggttcccc cacgccttcg
3961 gcgcggctcc ccctccggca aaaagtggcc cctccggggc ttgttgatcg actgcgcggc
4021 cttcggcctt gcccaaggtg gcgctgcccc cttggaaccc ccgcactcgc cgccgtgagg
4081 ctcggggggc aggcgggcgg gcttcgcctt cgactgcccc cactcgcata ggcttgggtc
4141 gttccaggcg cgtcaaggcc aagccgctgc gcggtcgctg cgcgagcctt gacccgcctt
4201 ccacttggtg tccaaccggc aagcgaagcg cgcaggccgc aggccggagg cttttcccca
4261 gagaaaatta aaaaaattga tggggcaagg ccgcaggccg cgcagttgga gccggtgggt
4321 atgtggtcga aggctgggta gccggtgggc aatccctgtg gtcaagctcg tgggcaggcg
4381 cagcctgtcc atcagcttgt ccagcagggt tgtccacggg ccgagcgaag cgagccagcc
4441 ggtggccgct cgcggccatc gtccacatat ccacgggctg gcaagggagc gcagcgaccg
4501 cgcagggcga agcccggaga gcaagcccgt agggcgccgc agccgccgta ggcggtcacg
4561 actttgcgaa gcaaagtcta gtgagtatac tcaagcattg agtggcccgc cggaggcacc
4621 gccttgcgct gcccccgtcg agccggttgg acaccaaaag ggaggggcag gcatggcggc
4681 atacgcgatc atgcgatgca agaagctggc gaaaatgggc aacgtggcgg ccagtctcaa
4741 gcacgcctac cgcgagcgcg agacgcccaa cgctgacgcc agcaggacgc cagagaacga
4801 gcactgggcg gccagcagca ccgatgaagc gatgggccga ctgcgcgagt tgctgccaga
4861 gaagcggcgc aaggacgctg tgttggcggt cgagtacgtc atgacggcca gcccggaatg
4921 gtggaagtcg gccagccaag aacagcaggc ggcgttcttc gagaaggcgc acaagtggct
4981 ggcggacaag tacggggcgg atcgcatcgt gacggccagc atccaccgtg acgaaaccag
5041 cccgcacatg accgcgttcg tggtgccgct gacgcaggac ggcaggctgt cggccaagga
5101 gttcatcggc aacaaagcgc agatgacccg cgaccagacc acgtttgcgg ccgctgtggc
5161 cgatctaggg ctgcaacggg gcatcgaggg cagcaaggca cgtcacacgc gcattcaggc
5221 gttctacgag gccctggagc ggccaccagt gggccacgtc accatcagcc cgcaagcggt
5281 cgagccacgc gcctatgcac cgcagggatt ggccgaaaag ctgggaatct caaagcgcgt
5341 tgagacgccg gaagccgtgg ccgaccggct gacaaaagcg gttcggcagg ggtatgagcc
5401 tgccctacag gccgccgcag gagcgcgtga gatgcgcaag aaggccgatc aagcccaaga
5461 gacggcccga g
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2201/pLVX-S100A9shRNA1-p猪源干扰质粒 |
| P2202/pLVX-S100A9shRNA2-p猪源干扰质粒 |
| P2203/pLVX-S100A9shRNA3-p猪源干扰质粒 |
| P0601/pShuttle-Survium病毒基因质粒 |
| P0669/pUC18-TMV病毒基因质粒 |
| P1800/pET11a-Hiv-1-Protease病毒基因质粒 |
| P2271/PET22-TEV-REV病毒基因质粒 |
| P0536/pET21b-TMVU1CP-His6人源基因质粒 |
| P1178/HBV 1.3-mer WT replicon病毒基因质粒 |
| P1285/pBABE-Puro SV40 LT病毒基因质粒 |
| P1819/pCDNA3.1-H1N1-ORF1病毒基因质粒 |
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文献和实验相关实验
pRK415 广宿主质粒 pRK2013 广宿主质粒 Kan pRADK 广宿主质粒 Kan 耐辐射奇球菌做表达 Taq酶 蛋白酶表达质粒 Amp
pMP2444广宿主荧光表达质粒
￥100 - 1000
