pBBR1MCS-Spe广宿主表达质粒

基本信息
名称：pBBR1MCS-Spe广宿主表达质粒
别称: pBBR1MCS6

启动子:	Lac
复制子:	pBBR1
质粒分类:	pBBR1MCS系列质粒
质粒标签:	LacZ
原核抗性:	Spe
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度
表达宿主:	广宿主
培养条件:	参考相关文献
5'测序引物:	M13R:CAGGAAACAGCTATGACC
3'测序引物:	M13F:TGTAAAACGACGGCCAGT
备注:	低拷贝质粒

质粒属性

载体宿主：	广宿主
载体用途：	蛋白表达
基因种属：	空载体
基因类型：	ORF
原核抗性：	Spe
筛选标记：
荧光蛋白：

质粒简介
 pBBR1MCS-Spe质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供

质粒图谱
 广宿主穿梭质粒pBBR1MCS-spe是基于质粒pBBR1MCS构建的[1]，该质粒是由Kovach等构建，已经证实可以在许多革兰氏阴性菌中进行复制[2]，包括Acetobacter xylinum、Alcaligenes eutrophus、Bartonella bacilliformis、百日咳杆菌（Bordetella spp.）、布鲁氏菌（Brucella spp.）、Caulobacter crescentus、大肠杆菌、Paracoccous denitrificans、荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）、恶臭假单胞菌（P. putida）、苜蓿根瘤菌（Rhizobium meliloti）、R. leguminosarum by. Viciae、球形红假单胞菌（Rhodobacter sphaeroides）、鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）、霍乱弧菌（Vibrio cholerae）和Xanthomonas campestris等。

质粒序列：详询


质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P1838/pCMV-HA-Ub-m小鼠基因质粒

P1866/pCS2 Notch1 Full Length-6MT小鼠基因质粒

P2139/pCMV-MYC-6×His-HSP70-m小鼠基因质粒

P2158/pcDNA-Ikka-HA WT小鼠基因质粒

P2386/pT3-myr-AKT-HA小鼠基因质粒

P2673/pmCherry-C1-mTrim21小鼠基因质粒

P2407/pCDNA3.1-Trim27-m-C1101G小鼠基因质粒

P2833/pECMV-3×FLAG-Barx1-m小鼠基因质粒

P3002/pEGFP-IRF3-m（1同义突变）小鼠基因质粒

P3003/pLVML-3×FLAG-Cxxc5-m-IRES-Puro小鼠基因质粒

P4260/pCDH-CMV-Bach2-m-EF1-Puro人源基因质粒

P3004/pEGFP-bmp2-m小鼠基因质粒