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- Xybio
- 上海
- P2335
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pCT74-Hygro
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pCT74-HygR真菌表达质粒
别称: pCT74-Hygro
| 启动子: | ToxA |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | Hyg |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 丝状真菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | Hyg |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pCT74-HygR质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0501/pCXLE-hSK人源基因质粒 |
| P0502/pCXLE-hOCT3/4-shp53-F人源基因质粒 |
| P0503/pCXWB-EBNA1人源基因质粒 |
| P0504/pCXLE-EGFP人源基因质粒 |
| P0496/pEGFP-Rnd1人源基因质粒 |
| P0497/pEGFP-Rnd2人源基因质粒 |
| P1768/pEGFP-KIF3b人源基因质粒 |
| P0544/pCDNA3-HA-p53人源基因质粒 |
| P2919/pCDNA3.1-P53-N-GST人源基因质粒 |
| P2938/pCDNA3.1-P53-DB-GST人源基因质粒 |
| P0545/pCDNA3-mTOR人源基因质粒 |
| P0546/pCMV-FLAG-TRAF3人源基因质粒 |
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文献和实验的转染试剂。根据选择的转染试剂，根据说明书要求制备转染复合物，其中转染试剂/DNA 配比，离子强度，pH 值等因素都有可能影响到转染效率。应该注意的是，一般情况下要求在不含血清或者其他蛋白的培养基中制备转染复合物，因为它们会对转染产生抑制效果。制备转染复合物的最佳孵育时间，不同转染试剂之间的差别非常巨大，但是这是非常关键的一个环节，直接影响到转染复合物制备的质量，所以应该严格按照说明书上的孵育时间进行。导致实验失败的还有很大一部分原因是因为污染问题，包括 DNA 污染，细菌、真菌、病毒、支原体等微生
【公告】核酸技术版零应助贴整理2007.6.1-2007.6.30，请大家积极参与讨论，加分从优！
/view?bid=64&id=9316091 74.【求助】求助:反向连接的真核表达载体就是反义RNA? http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=9320463 75.求助】关于Invitrogen的Trizol试剂和真核表达质粒 http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=9329201 76.【求助】酿酒酵母转化的问题 http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id
【公告】核酸技术版零应助贴整理2007.7.1-2007.7.30，请大家积极参与讨论，加分从优！
://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=9488616&sty=1&tpg=19&age=0 74. 【求助】哪位用过pCDF1-MCS1-EF1-copGFP ？ http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=9495098&sty=1&tpg=18&age=0 75. 【求助】基因融合表达 http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=9491568&sty=1&tpg=18&age
