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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pCT74-Hygro-sGFP
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pCT74-Hygro-sGFP真菌表达质粒
别称: pCT74-Hygro-sGFP
质粒属性
质粒简介
pCT74是一个真菌表达质粒，可用原生质体法转化进各种真菌。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5790 bp ds-DNA circular SYN 25-JAN-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5790
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
primer_bind 19..35
/label=SK primer
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
terminator 78..330
/label=NOS terminator
/note="nopaline synthase terminator and poly(A) signal"
CDS complement(349..1068)
/codon_start=1
/product="enhanced GFP"
/label=EGFP
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTFTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITHGMDELYK"
CDS 1855..2880
/codon_start=1
/gene="aph(4)-Ia"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from E. coli"
/label=HygR
/note="confers resistance to hygromycin"
/translation="MKKPELTATSVEKFLIEKFDSVSDLMQLSEGEESRAFSFDVGGRG
YVLRVNSCADGFYKDRYVYRHFASAALPIPEVLDIGEFSESLTYCISRRAQGVTLQDLP
ETELPAVLQPVAEAM-DAIAAADLSQTSGFGPFGPQGIGQYTTWRDFICAIADPHVYHWQ
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GDSQYEVANILFWRPWLACMEQQTRYFERRHPELAGSPRLRAYMLRIGLDQLYQSLVDG
NFDDAAWAQGRCDAIVRSGAGTVGRTQIARRSAAVWTDGCVEVLADSGNRRPSTRPRAK
E"
promoter complement(2947..2965)
/label=T3 promoter
/note="promoter for bacteriophage T3 RNA polymerase"
primer_bind complement(2986..3002)
/label=M13 rev
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 3010..3026
/label=lac operator
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(3034..3064)
/label=lac promoter
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 3079..3100
/label=CAP binding site
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
rep_origin complement(3388..3976)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(4147..5007)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
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LIKHW"
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/gene="bla"
/label=AmpR promoter
rep_origin complement(5138..5593)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
primer_bind 5735..5751
/label=M13 fwd
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
promoter 5758..5776
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
ORIGIN
1 caccgcggtg gcggccgctc tagaactagt ggatcccccg ggctgcagga attctcatgt
61 ttgacagctt atcatcggat ctagtaacat agatgacacc gcgcgcgata atttatccta
121 gtttgcgcgc tatattttgt tttctatcgc gtattaaatg tataattgcg ggactctaat
181 cataaaaacc catctcataa ataacgtcat gcattacatg ttaattatta catgcttaac
241 gtaattcaac agaaattata tgataatcat cgcaagaccg gcaacaggat tcaatcttaa
301 gaaactttat tgccaaatgt ttgaacgatc tgcagccggg cggccgcttt acttgtacag
361 ctcgtccatg ccgtgagtga tcccggcggc ggtcacgaac tccagcagga ccatgtgatc
421 gcgcttctcg ttggggtctt tgctcagggc ggactgggtg ctcaggtagt ggttgtcggg
481 cagcagcacg gggccgtcgc cgatgggggt gttctgctgg tagtggtcgg cgagctgcac
541 gctgccgtcc tcgatgttgt ggcggatctt gaagttcacc ttgatgccgt tcttctgctt
601 gtcggccatg atatagacgt tgtggctgtt gtagttgtac tccagcttgt gccccaggat
661 gttgccgtcc tccttgaagt cgatgccctt cagctcgatg cggttcacca gggtgtcgcc
721 ctcgaacttc acctcggcgc gggtcttgta gttgccgtcg tccttgaaga agatggtgcg
781 ctcctggacg tagccttcgg gcatggcgga cttgaagaag tcgtgctgct tcatgtggtc
841 ggggtagcgg ctgaagcact gcacgccgta ggtgaaggtg gtcacgaggg tgggccaggg
901 cacgggcagc ttgccggtgg tgcagatgaa cttcagggtc agcttgccgt aggtggcatc
961 gccctcgccc tcgccggaca cgctgaactt gtggccgttt acgtcgccgt ccagctcgac
1021 caggatgggc accaccccgg tgaacagctc ctcgcccttg ctcaccatgg cctatattca
1081 ttcattgtca gctatcgctg gcaacaagat ataagcgtgt acttacgatt ctaggaccct
1141 gcgaatagag ttggagttgg ataccgatgg acgattgtta gataggacgg gatgctgata
1201 gtcgaggtaa gttgttgagg gtggtggttt tatcaaggac ggacacctta gccctttata
1261 tacacagaat cttattgcta ggtagccgga cggtgcggat tccaggtatc agtaggccct
1321 ctgaatgtcc atgcaatgat gcccaacaat cgagacgatc ctacttcgga accgactcga
1381 tcctcgtcgg gcctacatgt atgagaccat gtgcacctcc gaagcatcct tacggagagc
1441 ggaattgcgc gtacagaact cctccatgca ttccaatcga taccgtcgac gttaactgat
1501 attgaaggag cattttttgg gcttggctgg agctagtgga ggtcaacaat gaatgcctat
1561 tttggtttag tcgtccaggc ggtgagcaca aaatttgtgt cgtttgacaa gatggttcat
1621 ttaggcaact ggtcagatca gccccacttg tagcagtagc ggcggcgctc gaagtgtgac
1681 tcttattagc agacaggaac gaggacatta ttatcatctg ctgcttggtg cacgataact
1741 tggtgcgttt gtcaagcaag gtaagtggac gacccggtca taccttctta agttcgccct
1801 tcctcccttt atttcagatt caatctgact tacctattct acccaagcat ccaaatgaaa
1861 aagcctgaac tcaccgcgac gtctgtcgag aagtttctga tcgaaaagtt cgacagcgtc
1921 tccgacctga tgcagctctc ggagggcgaa gaatctcgtg ctttcagctt cgatgtagga
1981 gggcgtggat atgtcctgcg ggtaaatagc tgcgccgatg gtttctacaa agatcgttat
2041 gtttatcggc actttgcatc ggccgcgctc ccgattccgg aagtgcttga cattggggag
2101 ttcagcgaga gcctgaccta ttgcatctcc cgccgtgcac agggtgtcac gttgcaagac
2161 ctgcctgaaa ccgaactgcc cgctgttctc cagccggtcg cggaggccat ggatgcgatc
2221 gctgcggccg atcttagcca gacgagcggg ttcggcccat tcggaccgca aggaatcggt
2281 caatacacta catggcgtga tttcatatgc gcgattgctg atccccatgt gtatcactgg
2341 caaactgtga tggacgacac cgtcagtgcg tccgtcgcgc aggctctcga tgagctgatg
2401 ctttgggccg aggactgccc cgaagtccgg cacctcgtgc atgcggattt cggctccaac
2461 aatgtcctga cggacaatgg ccgcataaca gcggtcattg actggagcga ggcgatgttc
2521 ggggattccc aatacgaggt cgccaacatc ctcttctgga ggccgtggtt ggcttgtatg
2581 gagcagcaga cgcgctactt cgagcggagg catccggagc ttgcaggatc gccgcgcctc
2641 cgggcgtata tgctccgcat tggtcttgac caactctatc agagcttggt tgacggcaat
2701 ttcgatgatg cagcttgggc gcagggtcga tgcgacgcaa tcgtccgatc cggagccggg
2761 actgtcgggc gtacacaaat cgcccgcaga agcgcggccg tctggaccga tggctgtgta
2821 gaagtactcg ccgatagtgg aaaccgacgc cccagcactc gtccgagggc aaaggaatag
2881 agtagatgcc gaccgggaac cagttaacgt cgacctcgag ggggggcccg gtaccagctt
2941 ttgttccctt tagtgagggt taatttcgag cttggcgtaa tcatggtcat agctgtttcc
3001 tgtgtgaaat tgttatccgc tcacaattcc acacaacata cgagccggaa gcataaagtg
3061 taaagcctgg ggtgcctaat gagtgagcta actcacatta attgcgttgc gctcactgcc
3121 cgctttccag tcgggaaacc tgtcgtgcca gctgcattaa tgaatcggcc aacgcgcggg
3181 gagaggcggt ttgcgtattg ggcgctcttc cgcttcctcg ctcactgact cgctgcgctc
3241 ggtcgttcgg ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac ggttatccac
3301 agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa
3361 ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg acgagcatca
3421 caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa gataccaggc
3481 gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc ttaccggata
3541 cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct catagctcac gctgtaggta
3601 tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac cccccgttca
3661 gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg taagacacga
3721 cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa caggattagc agagcgaggt atgtaggcgg
3781 tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac actagaagaa cagtatttgg
3841 tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct cttgatccgg
3901 caaacaaacc accgctggta gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag
3961 aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa
4021 cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat gagattatca aaaaggatct tcacctagat
4081 ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc aatctaaagt atatatgagt aaacttggtc
4141 tgacagttac caatgcttaa tcagtgaggc acctatctca gcgatctgtc tatttcgttc
4201 atccatagtt gcctgactcc ccgtcgtgta gataactacg atacgggagg gcttaccatc
4261 tggccccagt gctgcaatga taccgcgaga cccacgctca ccggctccag atttatcagc
4321 aataaaccag ccagccggaa gggccgagcg cagaagtggt cctgcaactt tatccgcctc
4381 catccagtct attaattgtt gccgggaagc tagagtaagt agttcgccag ttaatagttt
4441 gcgcaacgtt gttgccattg ctacaggcat cgtggtgtca cgctcgtcgt ttggtatggc
4501 ttcattcagc tccggttccc aacgatcaag gcgagttaca tgatccccca tgttgtgcaa
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4621 atcactcatg gttatggcag cactgcataa ttctcttact gtcatgccat ccgtaagatg
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4741 gagttgctct tgcccggcgt caatacggga taataccgcg ccacatagca gaactttaaa
4801 agtgctcatc attggaaaac gttcttcggg gcgaaaactc tcaaggatct taccgctgtt
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4921 caccagcgtt tctgggtgag caaaaacagg aaggcaaaat gccgcaaaaa agggaataag
4981 ggcgacacgg aaatgttgaa tactcatact cttccttttt caatattatt gaagcattta
5041 tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa ataaacaaat
5101 aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctaaa ttgtaagcgt taatattttg
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5701 tgggtaacgc cagggttttc ccagtcacga cgttgtaaaa cgacggccag tgaattgtaa
5761 tacgactcac tatagggcga attggagctc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pCT74-Hygro-sGFP真菌表达质粒
别称: pCT74-Hygro-sGFP
| 启动子: | ToxA |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | Hyg |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 丝状真菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | Hyg |
| 荧光蛋白： | 绿色 |
质粒简介
pCT74是一个真菌表达质粒，可用原生质体法转化进各种真菌。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5790 bp ds-DNA circular SYN 25-JAN-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5790
/organism="synthetic DNA construct"
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variants"
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variants"
protein_bind 3010..3026
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/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(3034..3064)
/label=lac promoter
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 3079..3100
/label=CAP binding site
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
rep_origin complement(3388..3976)
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/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(4147..5007)
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/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
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related antibiotics"
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LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
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/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
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primer_bind 5735..5751
/label=M13 fwd
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
promoter 5758..5776
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
ORIGIN
1 caccgcggtg gcggccgctc tagaactagt ggatcccccg ggctgcagga attctcatgt
61 ttgacagctt atcatcggat ctagtaacat agatgacacc gcgcgcgata atttatccta
121 gtttgcgcgc tatattttgt tttctatcgc gtattaaatg tataattgcg ggactctaat
181 cataaaaacc catctcataa ataacgtcat gcattacatg ttaattatta catgcttaac
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421 gcgcttctcg ttggggtctt tgctcagggc ggactgggtg ctcaggtagt ggttgtcggg
481 cagcagcacg gggccgtcgc cgatgggggt gttctgctgg tagtggtcgg cgagctgcac
541 gctgccgtcc tcgatgttgt ggcggatctt gaagttcacc ttgatgccgt tcttctgctt
601 gtcggccatg atatagacgt tgtggctgtt gtagttgtac tccagcttgt gccccaggat
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721 ctcgaacttc acctcggcgc gggtcttgta gttgccgtcg tccttgaaga agatggtgcg
781 ctcctggacg tagccttcgg gcatggcgga cttgaagaag tcgtgctgct tcatgtggtc
841 ggggtagcgg ctgaagcact gcacgccgta ggtgaaggtg gtcacgaggg tgggccaggg
901 cacgggcagc ttgccggtgg tgcagatgaa cttcagggtc agcttgccgt aggtggcatc
961 gccctcgccc tcgccggaca cgctgaactt gtggccgttt acgtcgccgt ccagctcgac
1021 caggatgggc accaccccgg tgaacagctc ctcgcccttg ctcaccatgg cctatattca
1081 ttcattgtca gctatcgctg gcaacaagat ataagcgtgt acttacgatt ctaggaccct
1141 gcgaatagag ttggagttgg ataccgatgg acgattgtta gataggacgg gatgctgata
1201 gtcgaggtaa gttgttgagg gtggtggttt tatcaaggac ggacacctta gccctttata
1261 tacacagaat cttattgcta ggtagccgga cggtgcggat tccaggtatc agtaggccct
1321 ctgaatgtcc atgcaatgat gcccaacaat cgagacgatc ctacttcgga accgactcga
1381 tcctcgtcgg gcctacatgt atgagaccat gtgcacctcc gaagcatcct tacggagagc
1441 ggaattgcgc gtacagaact cctccatgca ttccaatcga taccgtcgac gttaactgat
1501 attgaaggag cattttttgg gcttggctgg agctagtgga ggtcaacaat gaatgcctat
1561 tttggtttag tcgtccaggc ggtgagcaca aaatttgtgt cgtttgacaa gatggttcat
1621 ttaggcaact ggtcagatca gccccacttg tagcagtagc ggcggcgctc gaagtgtgac
1681 tcttattagc agacaggaac gaggacatta ttatcatctg ctgcttggtg cacgataact
1741 tggtgcgttt gtcaagcaag gtaagtggac gacccggtca taccttctta agttcgccct
1801 tcctcccttt atttcagatt caatctgact tacctattct acccaagcat ccaaatgaaa
1861 aagcctgaac tcaccgcgac gtctgtcgag aagtttctga tcgaaaagtt cgacagcgtc
1921 tccgacctga tgcagctctc ggagggcgaa gaatctcgtg ctttcagctt cgatgtagga
1981 gggcgtggat atgtcctgcg ggtaaatagc tgcgccgatg gtttctacaa agatcgttat
2041 gtttatcggc actttgcatc ggccgcgctc ccgattccgg aagtgcttga cattggggag
2101 ttcagcgaga gcctgaccta ttgcatctcc cgccgtgcac agggtgtcac gttgcaagac
2161 ctgcctgaaa ccgaactgcc cgctgttctc cagccggtcg cggaggccat ggatgcgatc
2221 gctgcggccg atcttagcca gacgagcggg ttcggcccat tcggaccgca aggaatcggt
2281 caatacacta catggcgtga tttcatatgc gcgattgctg atccccatgt gtatcactgg
2341 caaactgtga tggacgacac cgtcagtgcg tccgtcgcgc aggctctcga tgagctgatg
2401 ctttgggccg aggactgccc cgaagtccgg cacctcgtgc atgcggattt cggctccaac
2461 aatgtcctga cggacaatgg ccgcataaca gcggtcattg actggagcga ggcgatgttc
2521 ggggattccc aatacgaggt cgccaacatc ctcttctgga ggccgtggtt ggcttgtatg
2581 gagcagcaga cgcgctactt cgagcggagg catccggagc ttgcaggatc gccgcgcctc
2641 cgggcgtata tgctccgcat tggtcttgac caactctatc agagcttggt tgacggcaat
2701 ttcgatgatg cagcttgggc gcagggtcga tgcgacgcaa tcgtccgatc cggagccggg
2761 actgtcgggc gtacacaaat cgcccgcaga agcgcggccg tctggaccga tggctgtgta
2821 gaagtactcg ccgatagtgg aaaccgacgc cccagcactc gtccgagggc aaaggaatag
2881 agtagatgcc gaccgggaac cagttaacgt cgacctcgag ggggggcccg gtaccagctt
2941 ttgttccctt tagtgagggt taatttcgag cttggcgtaa tcatggtcat agctgtttcc
3001 tgtgtgaaat tgttatccgc tcacaattcc acacaacata cgagccggaa gcataaagtg
3061 taaagcctgg ggtgcctaat gagtgagcta actcacatta attgcgttgc gctcactgcc
3121 cgctttccag tcgggaaacc tgtcgtgcca gctgcattaa tgaatcggcc aacgcgcggg
3181 gagaggcggt ttgcgtattg ggcgctcttc cgcttcctcg ctcactgact cgctgcgctc
3241 ggtcgttcgg ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac ggttatccac
3301 agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa
3361 ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg acgagcatca
3421 caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa gataccaggc
3481 gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc ttaccggata
3541 cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct catagctcac gctgtaggta
3601 tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac cccccgttca
3661 gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg taagacacga
3721 cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa caggattagc agagcgaggt atgtaggcgg
3781 tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac actagaagaa cagtatttgg
3841 tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct cttgatccgg
3901 caaacaaacc accgctggta gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag
3961 aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa
4021 cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat gagattatca aaaaggatct tcacctagat
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4201 atccatagtt gcctgactcc ccgtcgtgta gataactacg atacgggagg gcttaccatc
4261 tggccccagt gctgcaatga taccgcgaga cccacgctca ccggctccag atttatcagc
4321 aataaaccag ccagccggaa gggccgagcg cagaagtggt cctgcaactt tatccgcctc
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5161 ttaaaattcg cgttaaattt ttgttaaatc agctcatttt ttaaccaata ggccgaaatc
5221 ggcaaaatcc cttataaatc aaaagaatag accgagatag ggttgagtgt tgttccagtt
5281 tggaacaaga gtccactatt aaagaacgtg gactccaacg tcaaagggcg aaaaaccgtc
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5701 tgggtaacgc cagggttttc ccagtcacga cgttgtaaaa cgacggccag tgaattgtaa
5761 tacgactcac tatagggcga attggagctc
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0635/pEGFP-Timp1人源基因质粒 |
| P0577/pEGFP-IL1A人源基因质粒 |
| P0578/pEGFP-IL12B人源基因质粒 |
| P0579/pEGFP-FAK人源基因质粒 |
| P0580/pEGFP-ICAM1人源基因质粒 |
| P3059/pEGFP-SOST人源基因质粒 |
| P0677/pCDNA3.0-TLR2-CFP人源基因质粒 |
| P0639/pCDNA3.1-VEGFA人源基因质粒 |
| P0629/CD8A-CD8B人源基因质粒 |
| P0539/Lenti-Puro-ARID1A人源基因质粒 |
| P0533/pEGFP-GRK2人源基因质粒 |
| P0534/pIRES2-ZsGreen1-P65人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
的转染试剂。根据选择的转染试剂，根据说明书要求制备转染复合物，其中转染试剂/DNA 配比，离子强度，pH 值等因素都有可能影响到转染效率。应该注意的是，一般情况下要求在不含血清或者其他蛋白的培养基中制备转染复合物，因为它们会对转染产生抑制效果。制备转染复合物的最佳孵育时间，不同转染试剂之间的差别非常巨大，但是这是非常关键的一个环节，直接影响到转染复合物制备的质量，所以应该严格按照说明书上的孵育时间进行。导致实验失败的还有很大一部分原因是因为污染问题，包括 DNA 污染，细菌、真菌、病毒、支原体等微生
【公告】核酸技术版零应助贴整理2007.6.1-2007.6.30，请大家积极参与讨论，加分从优！
/view?bid=64&id=9316091 74.【求助】求助:反向连接的真核表达载体就是反义RNA? http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=9320463 75.求助】关于Invitrogen的Trizol试剂和真核表达质粒 http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=9329201 76.【求助】酿酒酵母转化的问题 http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id
【公告】核酸技术版零应助贴整理2007.7.1-2007.7.30，请大家积极参与讨论，加分从优！
://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=9488616&sty=1&tpg=19&age=0 74. 【求助】哪位用过pCDF1-MCS1-EF1-copGFP ？ http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=9495098&sty=1&tpg=18&age=0 75. 【求助】基因融合表达 http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=9491568&sty=1&tpg=18&age
pCT74-Hygro-sGFP真菌表达质粒
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