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- Xybio
- 上海
- P0478
- 2026年05月27日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid #54467,pSAG1::Cas9-U6::SgUPR
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pSAG1-Cas9-U6-sgUPRT弓虫编辑质粒
别称: Plasmid #54467,pSAG1::Cas9-U6::SgUPR
| 原核抗性: | Amp |
|---|---|
| 克隆菌株: | Stbl3 |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 昆虫细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 基因敲除 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | CRISPR |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pSAG1-Cas9-U6-sgUPRT质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3627/pCMV-SPORT6-OTULINL人源基因质粒 |
| P3628/pCMV-SPORT6-PDE9A（2同义突变）人源基因质粒 |
| P3629/pCMV-SPORT6-PEX11A（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3630/pCMV-SPORT6-CXorf40B人源基因质粒 |
| P3631/pCMV-SPORT6-TMCO6人源基因质粒 |
| P3632/pCMV-SPORT6-SYF2人源基因质粒 |
| P3633/pCMV-SPORT6-PTMS人源基因质粒 |
| P3634/pCMV-SPORT6-STX8（2同义突变）人源基因质粒 |
| P3635/pCMV-SPORT6-APOC1人源基因质粒 |
| P3636/pCMV-SPORT6-GNA15人源基因质粒 |
| P3637/pCMV-SPORT6-RPL18人源基因质粒 |
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文献和实验的表达质粒。A）PCR 扩增的方法U6：来源于人 U6 小核启动子，常用小 RNA 表达，转录本为 shRNA。将 sgRNA 放到 U6 后面，利用 U6 的启动来扩增 sgRNA。将这部分内容整合到 Cas9 expression plasmid pSpCas9（Cas9 表达质粒）中，一起共转。B）sgRNA 表达质粒的方法现在我要用这个方法来举例设计 p53 引物找到包括 sgRNA 序列的前后 1000 个碱基的序列（2000 bp）找到的序列如下：将上面复制的序列粘贴到 blast 中
CRISPR/Cas9 系统作为细菌和古细菌的获得性免疫系统， 通过 RNA 介导特异性的切割外源遗传物质， 用以对抗入侵的病毒和质粒。利用 Cas9 来摧毁入侵 DNA 的 Type Ⅱ CRISPR/Cas 系统， 可以在体外进行基因的编辑。为了提高CRISPR/Cas9 的特异性，使用 Cas9 切口酶和一对 sgRNA，两个相近的切口造成 DNA 双链断裂， 诱导细胞发生非同源末端连接修复， 造成目的基因的突变。利用 CRISPR/Cas9 进行基因的编辑，首先要构建有效的 sgRNA
强启动子（如 CMV、EF1a）下，细胞大量生产该蛋白；干扰是把 shRNA 挂 U6 启动子，走 RNAi 降解 mRNA；敲除是用 Cas9 在基因组切一刀，让编码框乱码、蛋白彻底失活。三者的"作用层"不一样：过表达和干扰动的是 RNA/蛋白量，敲除动的是基因组本身。编码基因的过表达通常只需要过表达编码区（CDS）部分即可，不一定要带上启动子、5'/3'UTR，这就省了不少载体空间。 把这个细节也想清楚 过表达、干扰和敲除回答的是不同科学问题。 过表达看“增加后会怎样”，干扰看“降低后会
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