- ￥1280
- Frdbio
- MCC1610
- 2025年08月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 规格：
100ul*10
DH10BAC感受态细胞
| 产品编号 |
产品名称 |
规格 |
| MCC1610 |
DH10BAC感受态细胞 |
100μl*10 |
| pUC19（control vector） |
10pg/μl；10μl |
保存条件：-80℃。
1.产品简介：
本产品是采用大肠杆DH10BAC菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，主要用于生产重组杆状病毒分子（Bac-to-Bac杆状病毒表达系统），可用于蓝白斑筛选。
基因型：F- mcrA (mrr-hsdRMS-mcrBC) 80lacZM15 lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆ (ara,leu)7697 galU galK λ- rpsL nupG /pMON14272 / pMON7124
特点：1. DH10BAC菌株中含有父本杆粒 bMON14272 、 辅助质粒 pMON7124 ： 父本杆粒 bMON14272包含 mini-F 复制子, 卡那抗性基因, attTn7 位点和 lacZα互补因子；辅助质粒 pMON7124 含有 tnsABCD 区，具有四环素抗性，在细胞扩增过程中丢失，但可提高供体质粒 pFastBac 转化后的基因转座效率。2. mcrA、mcrBC 及 mrr 突变使 DH10Bac 菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的 DNA。3. recA1 和 endA1 的突变有利于插入 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。4.φ80dlacZ∆M15 的存在使 DH10BAC 可用于蓝白斑筛选。具卡那霉素和四环素抗性，pUC19质粒检测，转化效率可达108 cfu/μg DNA。
2.使用说明：
1．取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。
2．待感受态细胞融化后，加入适量目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），并用手拨打 EP 管底轻轻混匀，冰浴30min。
3．42℃热击45sec，然后快速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min，该过程不要摇动离心管。
4．每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床， 150 rpm振荡培养45～60min使菌体复苏。
5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12~16h。
3.注意事项：
1．感受态细胞最好在冰上融化。
2．混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3．转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
4．涂板时务必涂干，平板表面不留任何水渍。
*本试剂仅供实验室研究使用
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文献和实验样（比如 GeneArt EX 超长版就建议用 DH10B 电转感受态细胞）。市面上有多种为满足不同需求而优化条件的商品化组装克隆试剂盒，可以根据自己的需求选出最合适自己需要的——选对合适的 Kit ，每天都是好心情，实验高歌猛进充满成就感；选不合适就只能天天 re-search 了——反反复复来来回回(re-)地摸索(search)尝试，挺折磨的。选择kit时一般留意几个参数：插入片段长度，单次反应可插入片段数量，同源序列长度——即合成引物时要求添加的载体同源序列长度，反应时间，当然还有克隆效率（几个领先品牌的产品
Mutagenesis of Viral BACs With Linear PCR Fragments (ET Recombination)
Principle steps of mutagenesis. (A) Preparation of electrocompetent bacterial cells for mutagenesis. Prior to mutagenesis the plasmid pKD46, encoding the recombination functions, is introduced into DH10B containing the viral BAC. In the next step
系列）：高拷贝会导致大片段质粒复制压力大，易丢失或断裂，优先用低拷贝载体（如 pACYC184，拷贝数 10-15）或大片段专用载体（如 BAC 载体 pBeloBAC11，可容纳 100kb 以上片段，在大肠杆菌中稳定存在）； ④选择合适的连接方法，比如 Gibson 组装（无缝克隆）的方法更适合 10-20kb 大片段的连接，相比传统的 T4 连接的方法，成功率更高，操作更简便； ⑤选择重组缺陷型感受态，提高大质粒的转化效率，如 Stbl3、DH10B 等，此外转化方式也会影响转化
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